抗生素类药物的分析讲解说明.ppt

抗生素类药物的分析;第一节 概述; 特点：化学纯度较低, 同系物多，异构体多，降解物多；活性组分易发生变异；稳定性差。 鉴别方法：生物学法，理化方法 特殊检查项目：异常毒性、热源或细菌内毒素、降压物质、无菌，组分分析 ，聚合物等。;抗生素质量的复杂性 ;抗生素活性表示方法;分类（按结构与性质）： β–内酰胺类、氨基糖苷类、 四环素类、大环内酯类、 氯霉素类、多肽类、抗肿瘤类 林可霉素类、其他抗生素类;第二节 β–内酰胺类抗生素 ;头孢菌素类;*;青霉素;氨苄西林（氨苄青霉素）;阿莫西林（羟氨苄青霉素）;普鲁卡因青霉素;头孢氨苄;头孢拉定;头孢羟氨苄;头孢噻吩钠;酸性;与有机碱(普鲁卡因)成盐 ;; ;青霉素钠UV7-20;;（四）β–内酰胺环 ;（某些金属离子） （温度）;例;;二、;（二）呈色反应;H+;2、;3. 茚三酮反应;α-氨基、伯胺 某些羟基胺类;4. 双缩脲反应;蓝紫色;5. 与变色酸-硫酸反应;150℃;（缩合）;6. 与重氮苯磺酸反应;（偶合）;;7. 与铜盐反应;（三）沉淀反应;2. 有机胺盐反应;普鲁卡因;;（2）与三硝基苯酚反应 ;mp;光谱法;Cu2+;;氯唑青霉素 　 341 0.682;2、;色谱法;三、特殊杂质检查;聚合物——HPLC法 色谱条件与系统适用性试验 用葡聚糖凝胶G-10（40～120?m）为填充剂，玻璃柱内径1.3～1.5cm，床体积50～60mL；流动相A为含3.5%硫酸铵的0.01mol/L磷酸盐缓冲液（取磷酸氢二钠2.19g和磷酸二氢钠0.54g，加水1000mL使溶解，调节pH值至7.0），流动相B为0.01%十二烷基硫酸钠溶液；流速为每分钟1mL；检测波长为254nm。以流动相A为流动相，用1mg/mL蓝色葡聚糖2000溶液进样200?L进行测定，理论板数应不低于900，拖尾因子在0.75～1.5，对照品溶液以流动相B为流动相，重复进样200?L，峰面积值的相对标准差应小于5.0%。;对照品溶液的制备 取头孢他啶对照品适量，精密称定，加水制成含头孢他啶100?g/1mL的溶液，摇匀。 测定法 取本品适量，精密称定，加水制成含头孢他啶20mg/1mL的溶液，立即进样200?L，以流动相A为流动相进行测定，记录色谱图；另取对照品溶液200?L注入液相色谱仪，以流动相B为流动相，记录色谱图，按外标法计算，本品含头孢他啶聚合物以头孢他啶计不得过0.3%。 ;自身对照外标法的原理： 该法是利用特定条件下β-内酰胺类抗生素可以缔合成与高分子杂质有相似色谱行为的缔合物，即在Kav=0处表现为单一的色谱峰。 以药物自身为对照品，测定其在特定条件下缔合时的峰响应指标； 然后改变色谱条件，测定样品，记录样品色谱图中Kav=0处的高分子杂质峰的响应指标， 按外标法计算，即得样品中高分子杂质相当于药品本身的相对含量。;有关物质和异构体 例1 头孢呋辛酯中有关物质和异构体的检查： 色谱条件与系统适用性试验：要求头孢呋辛酯A，B异构体之间、头孢呋辛酯A异构体与头孢呋辛酯△2-异构体之间的分离度R﹥1.5；理论板数按头孢呋辛酯A异构体峰计算，n≥1500。 异构体——照含量测定项下方法试验。以A异构体峰的相对tR为1.0，B异构体峰的相对tR约为0.85， 供试品色谱图中A异构体峰的面积与A、B异构体峰的面积和之比应为0.48～0.55。 有关物质——按自身对照法测定有关物质限量;△2-异构体是取头孢呋辛酯对照品经加热破坏处理而制得的，其相对tR约为1.2 。 ;吸收度 如青霉素钠（钾）的吸收度检查： 取本品，加水制成每1mL中含1.80mg的溶液，照分光光度法，在280nm的波长处测定吸收度，不得大于0.10；在264nm的波长处有最大吸收，吸收度应为0.80～0.88。 此法中264nm 处吸收值用来控制青霉素钠（钾）的含量，280nm处吸收值用来控制杂质的量。 头孢氨苄中有关物质的检查——反相TLC法 （自学）;四、含量测定;（水解）;反应分两步进行： 1. 水解反应 (按化学计算量进行) 2. 氧化-还原反应 (无固定的量关系，受温度、PH值和时间等因素影响，应严格控制反应条件并采用标准品平行对照测定) ;第一步;例;至近终点时加淀粉指示液，继续滴定并强力振摇，至蓝色消失；另精密量取供试品溶液5ml，置碘瓶中，加醋酸-醋酸钠缓冲液（pH4.5）5ml，精密加入碘滴定液（0.01mol/L）15ml，密塞，摇匀，在暗处放置20分钟，用硫代硫酸钠滴定液（0.01mol/L）滴定，作为空白。同时用青霉素钠对照品同法测定作对照，算出供试品的含量。;V样