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生物膜系统及细胞工程 复习15 一、生物膜系统 生物膜的组成：细胞膜，核膜以及由膜围成的细胞器组成的连续统一的膜系统。 生物膜的结构：蛋白质＋脂质＋多糖 功能：均具有一定的流动性及选择透过性 作用：物质运输、信息传递、能量转变、细胞识别 1、直接联系的膜： 2、间接联系的膜 内质网 高尔基体 细胞膜 小泡 小泡 膜的转变依赖于膜的一定的流动性 核膜 内质网 细胞膜 同位素标记法：32P标记磷脂→内质网→其它膜结构 突触小泡、分泌小泡、吞噬小泡 验证膜具有连续性： 分泌蛋白的合成及分泌过程 氨基酸 核糖体 内质网 高尔基体 细胞膜 合成翻译 未成熟的Pr 加工运输 较成熟的Pr 加工包装 成熟的Pr 外排 具特定功能的Pr 体现了生物膜在功能上的连续性（明确分工，紧密联系） 跨膜层数？？？ 细胞分化与细胞全能性之间的关系 三-1、 植物组织培养 离体的植物器官、组织或细胞(高度分化了的) 愈伤组织(细胞团) 根,芽(胚状体) 植物体 外植体 脱分化 再分化 植物激素： 细胞分裂素、生长素 (离体的植物器官、组织或细胞) 脱分化 再分化 三-1、植物组织培养 1、植物组织培养过程 愈伤组织 根、芽 植物体 2、培养条件： 含有全部营养成分的培养基、一定的温度、空气、无菌环境、适合的PH、适合的光照等 外植体 举例： 花药离体培养 基因工程培育的抗棉铃虫的棉花植株 细胞工程中培育的“番茄-马铃薯”杂种植株 愈伤组织再分化过程应先诱导生芽，再诱导生根 当细胞分裂素与生长素浓度比高时，有利于芽的发生；浓度比低时，有利于根的发生。 二、植物细胞工程 植物细胞工程的理论基础是： 植物细胞的全能性 植物组织培养植物体细胞杂交 过程 动物胚胎或幼龄动物的组织、器官 细胞悬浮液 胰蛋白酶 （分解弹性纤维） 10代细胞 原代培养 50代细胞 传代培养 细胞株 无限传代 细胞系 遗传物质未改变 遗传物质改变 三-2、动物细胞培养 使细胞分散 剪碎 植物组织培养和动物细胞培养的比较 项目 培养基 结果 应用 植物组织培养 动物细胞培养 均需适宜的外界条件：PH,温度,营养及“无菌,无毒环境” 固体，营养物质，蔗糖、植物激素 培养成植株 液体，营养物质，葡萄糖、动物血清 培育成细胞系或细胞株 （1）生产蛋白质制品（如病毒疫苗、干扰素、 单克隆抗体、动物激素） （2）用于某些器官移植 （1）试管苗的快速繁殖 （2）无病毒植物的培育 （3）生产药物等 （4）人工种子 （5）转基因植物的培育 植物A细胞 植物B细胞 去壁 原生质体A 原生质体B 原生质体融合 融合细胞 再生壁 杂种细胞 脱分化 去壁的常用方法： 酶解法（纤维素酶、果胶酶等） 原生质体融合方法： 物理法：离心、振动、电刺激等 化学法：聚乙二醇（PEG） 四-1、植物体细胞杂交 融合成功的标志 人工诱导 筛选 愈伤组织 杂种植株 再分化 细胞A 细胞B 杂种细胞 物理法、化学法 灭活的仙台病毒 四-2、动物细胞融合 过程 诱导动物细胞融合与植物原生质体融合的原理和方法是否基本相同？ 制备单克隆抗体 不具有繁殖性但具有抗原性 动物细胞融合 仙台病毒 丧失感染活性（不感染细胞） 保留融合活性（诱导细胞融合） 紫外线 物理法 化学法 生物法 主要用于制备单克隆抗体 获得杂种植株 用途 物理、化学方法（同左） 生物：灭活的病毒 物理（离心、振荡、电刺激） 化学（PEG） 诱导方法 使细胞分散后诱导细胞融合 去除细胞壁后诱导原生质体融合 细胞融合的方法 细胞膜的流动性 细胞膜的流动性、植物细胞全能性 原理 动物细胞融合 植物体细胞杂交 比较项目 植物体细胞杂交、动物细胞融合的比较 细胞工程可用于微生物工程菌（优良菌种）的培育？ 抗原 动物体内 刺激 效应B 抗体 特点：产量低、特异性差、纯度低、反应不够灵敏 五、单克隆抗体 1、常规抗体制备： 一个B淋巴细胞：只分泌一种特异性抗体 2、单克隆抗体 杂交瘤细胞 小鼠骨髓瘤细胞：能无限增殖 融合 单克隆抗体 培养 实验目的:制备单克隆抗体. 实验原理：B淋巴细胞能产生抗体，骨髓瘤细胞能无限增殖，杂交瘤细胞既能产生抗体又能无限增殖。 实验材料：小白鼠 实验器材：培养皿、针筒等等。 实验过程：如下页 根据阿根廷科学家米尔斯坦和德国科学家柯勒设计的 实验方案: 抗原注入小鼠体内 已免疫的B淋巴细胞 骨髓瘤细胞 筛选出杂交瘤细胞 筛选出能产生特异性抗体的细胞群 体外培养 体内培养 从培养液中提取 从小鼠腹水中提取 单克隆抗体 细胞融合 动物细胞培养 单克隆抗体的制备 (特定的选择培养基)