第6章_体细胞胚胎发生和人工种子.pptVIP

第六章 体细胞胚胎发生和人工种子 体细胞胚胎发生（somatic embryogenesis）：从体细胞产生胚状体的过程 体细胞胚（somatic embryo）或不定胚（adventitious embryo）：体细胞离体培养诱导产生的胚或胚状体 体细胞胚胎发生有两种用途：1、通过胚状 体再生植株，进行快繁、体细胞无性系变异和转基因研究 2、利用体细胞胚制作杂交种的人工种子 第一节 体细胞胚胎发生 ※普遍发生 胚状体的发生过程： 1、直接从器官上发生 子叶和下胚轴最容易诱导体细胞胚胎发生 2、从愈伤组织上发生 离体培养的外植体先增生愈伤组织，再从 愈伤分化胚状体这是体细胞胚胎发生最为常见的 方式。 胚性愈伤组织（embryogenic callus）：能够产生胚状 体的愈伤组织。 3、从游离的单细胞发生 影响胚状体发生和发育的因素 1 1、供体植物的基因型 2、外植体的来源和培养物的生理状况 双子叶植物的下胚轴和子叶、禾谷类幼 胚的盾片和幼穗都是容易诱导胚状体的外植体 随着胚性愈伤组织继代培养次数的增加， 胚状体发生能力逐渐降低。而有些植物的愈伤 要经长期培养才产生胚状体。 影响胚状体发生和发育的因素 2 3、培养基中的外源激素 ①诱导胚状体的全过程不需要激素。 ②诱导胚状体的全过程需要外源激素。 ③诱导胚状体的前期培养需要激素，后期不需要激素或需要极低浓度的激素。 比较常见。 一般先在有激素的培养基上诱导外植体产生愈伤，然后转入无激素培养基诱导胚状体。 在含2,4-D培养基上诱导的愈伤更易分化胚状体。 单子 叶植物外植体产生愈伤，其浓度1～5mg/L。双子叶需要的浓度低，0.1~1.0mg/L。 影响胚状体发生和发育的因素 3 ☆一般，赤霉素对胚状体的形成没有好处。 ☆脱落酸（ABA）对胚状体的后期发育有促进作用。 ☆腺嘌呤有利于胚状体的诱导。 5、培养基的氮源 还原性氮（铵态氮）高低直接影响胚状体的诱导效果 MS培养基有利于胚状体形成 有机氮源有利于胚状体发生。 脯氨酸对禾谷类胚状体发生有重要作用。 6、天然提取物与活性炭对胚状体形成作用 椰乳对胚胎发生最有效物质；活性炭吸附有毒有害物质。 第二节 人工种子 人工种子（artificial seeds）：将植物组培产生的胚状体包裹上用有机化合物和营养物质制作的人工种皮。 人工种子制作要求：要求能够同步地、大规模地产生成熟的体细胞胚状体；给胚状体包裹上高质量的人工种皮；最后解决人工种子的保存和运输问题。 控制胚状体的同步发育 控制胚状体同步发育的方法： 1、用 DNA抑制剂处理细胞培养物 5-氨基尿嘧啶；低温处理抑制细胞分裂，再把温度提高到正常的培养温度，也可达到部分同步化。 2、分离过筛 可获得大小均一的胚性细胞团，再转移到无激素培养基上培养，可得到大小基本一致的胚状体。 3、利用气体调控胚状体的同步发生 间歇性地向悬浮培养物中通氮气或乙烯可达到胚状体发生的同步化。 4、利用渗透压调控胚状体的同步生长 胚状体由小到大，其渗透压由高到低。可用高浓度的蔗糖培养基来控制胚的发育，使其停留于某一阶段，然后降低蔗糖浓度，使胚状体进入同步发育的状态。 胚状体的包埋与人工种子的制作 人工种皮要满足的要求：①包埋剂应当对胚状体无害，成本低廉；②要有一定硬度，能保护胚状体不受损害；③应当含有生长激素和防腐剂，有利于胚状体的萌发。 好的包埋剂：既能包住体细胞胚，又能保证胚的存活和正常萌发 褐藻酸盐、琼脂、白明胶、角叉菜胶和槐豆胶 最好是褐藻酸盐 包埋过程 胚状体和2％藻酸钠混合，吸管吸入，滴到2.5%氯化钙水溶液中，两种离子交换，在胚状体外面产生褐藻酸钙的胶囊，形成人工种皮。 胶囊大小，人工种皮厚度都可以控制。 人工胚乳：营养物质、植物激素和抗菌物质。 * *