红霉素生物合成基因eryA启动子的克隆与功能研究.pdfVIP

摘要 红霉素生物合成基因eryA启动子的克隆与功能研究 摘要 eryA是直接控制着红霉素母环6-脱氧-红霉内酯B合成的基因，在红霉素生物 合成过程中具有重要作用。本研究克隆TeryA基因的启动子PeryA，以绿色荧光 蛋白基因作为报告基因，构建了一种大肠杆菌．糖多孢红霉菌穿梭型质粒。荧光 显微镜观察发现PeryA不但在糖多孢红霉菌中起作用，而且在异源宿主变铅青链 霉菌中也具有功能。随后，以变铅青链霉菌为宿主，详细研究了该启动子作为 链霉菌表达载体启动子的特征，结果发现该启动子的．35区并不是必需的，而且 仅有一10区、长度为41bp的该启动子在链霉菌中仍可以表达外源基因。定点突变 证明-10区对于该启动子是不可缺少的。因此，4lbp的该启动子片段可作为链霉 菌的有效启动子，这是迄今为止所发现的最短的链霉菌启动子之一，对构建新 的链霉菌表达载体将非常有用。 此外，我们对PeryA启动子附近的区域进行了初步分析，结果发现包括eryA 编码基因前300bp的启动子序列不能表达外源基因，其具体原因的阐明将为更 深入探讨红霉素生物合成基因调控奠定基础。 关键词 红霉素：eryA基因；启动子；糖多孢红霉菌；