荷斯坦奶牛瘤胃微生物宏基因组BAC文库的构建与分析.pdfVIP

摘要 瘤胃微生物生态群落是一个非常复杂的生物网络体系，有着巨大的基因资源以及丰富的 生物关系资源。研究表明通过纯培养技术已经分离的种类约有11％，大部分信息仍处于未知 状态。采用免培技术研究微生物生态是新型发展的方法，再结合BAc建库技术开展瘤胃微生 物宏基因组及功能的研究，在理论与实践都具有重要的意义。 BAc文库构建的核心是获得高纯度的大片段的DNA，而复杂的瘤胃微生物体系中，所含 成分非常复杂，掺杂有大量多糖、脂类等抑制分子操作的物质，DNA的提取过程中不可避免 地会出现降解。我们已试验了各种方法，通过系统的分类清洗样品，改进包埋和裂解细胞、 去除杂质的程序，成功建立了一套能够获得大于2Mb的且纯度较高的瘤胃宏基因组DNA方 载体上，转化E．coliEPl300，得到瘤胃微生物BAC文库，经对文库的鉴定分析，该文库的 100代的鉴定结果说明该类型BAC克隆的稳定性。 通过直接活性筛选的方法，得到26个具有纤维素酶活性的阳性克隆，16个具有淀粉酶 活性的阳性克隆；进一步对这些纤维素酶阳性克隆进行多酶活性的分析，表明每个克隆至少 具有2种与纤维素半纤维素降解有关的酶活性，并且酶切指纹图谱呈现不同的类型，间接说 明已构建的库内基因的多样性和功能性。 挑取了