真核生物中基因表达水平的分析一方案介绍.pptVIP

真核生物中基因表达水平的分析;第二节 染色质水平上的基因活化调节;二、转录基因与核小体的结构;三、蛋白质的修饰与基因活化调节; ;二、真核基因顺式作用元件 （一）、顺式作用元件概念 指DNA上对基因表达在调节活性的某些特定的调控序列，其活性仅影响其自身处于同一DNA分子上的基因。 （二）、种类 启动子、增强子、静止子 ;1、启动子的结构和功能;（1）TATA框（TATA frame）：其一致顺序为TATAA(T)AA(T)。TATA框中心在-30附近，相当于原核的-10序列（pribnow box）。 对大多数真核生物来说，RNA聚合酶与TATA框牢固结合之后才能开始转录。 TATA框的左右富含G┇C 序列，这就有利于该框与RNA聚合酶形成开放性启动子复合物。 ;（2）CAAT框（CAAT frame）：位置在-75附近，一致序列为GG C(T)CAATCT。CAAT框可能控制着转录起始的频率。 （3）GC框 在-90bp左右的GGGCGG序列称为GC框。 ;RNA聚合酶I转录调控区 ;一个在-30—+15即核心启动子(core promoter element)，另一为上游启动子区(upstream promoter element)在-150—-50，不同物种的启动子因子有显著差异，启动子区没有和mRNA的TATA和CAAT盒顺序，故物种间大前体-rRNA基因的转录起始是不同的。基因间间隔含一个或几个终止信号可终止其之前的基因的转录而其本身不转录，间隔区含多种反向顺序可作为增强子结合转录因子。;增强子（enhancer）：又称为远上游序列（far upstream sequence) 。它是远距离调节启动子以增加转录速率的DNA序列，其增强作用与序列的方向无关，与它在基因的上下游位置无关。增强子有强烈的细胞类型选择，即不同细胞类型，增强作用不同。 ;（1）它能通过启动子大幅度地增加同一条DNA链上靶基因转录的频率，一般能增加 10～200倍，有的甚至可达千倍。 （2）增强子的作用对同源或异源的基因同样有效，如把SV40 的增强子连接到兔β-珠蛋白的基因上，可使转录强度增大100倍； （3）增强子的位置可在基因5′上游、基因内或其3′下游的序列中，而其作用与所在基因旁侧部位的方向似无关系，因为无论正向还是反向，它都具有增强效应；;（4）增强子所含核苷酸序列大多为重复序列，其内部含有的核心序列，对于它进入到另一宿主之后重新产生增强子效应至关重要； （5）增强子一般都具有组织和细胞特异性； （6）增强子在DNA双链中没有5′与3′固定的方向性；;（7）增强子可远离转录起始点，通常在 1～4 kb（个别情况可达30 kb）外起作用； （8）增强子的活性与其在DNA双螺旋结构中的空间方向性有关。另外，许多增强子还受到外部信号的调控，如金属硫蛋白基因的增强子就可对环境中的锌、镉浓度作出反应。 ;3、静止子 类似增强子但起负调控作用的顺式元件。静止子与反式作用因子（蛋白质）结合后，使正调控系统失去作用。;三、转录的起始调节 ;类型II基因的转录因子 普遍性转录因子: 作用于基本核心启动子如TATA box、INR(转录起始区)，每种细胞类型都必需的，如TFIID/A/B/E/F/G/H/I等。 特异性转录因子: 作用于转录起始复合物形成过程的靶分子和控制位点，含DNA特异性序列结合结构域和激活结构域(有的两者都有)。;;;普遍性转录因子的结构与功能 TFIID的TBP(TATA binding protein)结构域结合启动子的TATA box，促进其它转录因子的结合。TFII I 结合INR。许多普遍性转录因子含有与RNA聚合酶?因子相似的结构域，识别特异启动子起始转录。 ;RNA pol.II的结构与功能： CTD结构域含YSPTSPS的重复单位, 不同物种重复数不同，CTD对转录活性是必需的，其Ser/Thr可以被不同程度磷酸化在转录起始与延伸中具有重要作用。;例：RNA聚合酶Ⅱ 转录起始复合物的组装 第一步是转录因子 TFⅡD与 TATA框特异性结合，形成 TFⅡD-启动子复合体，后者进而指导聚合酶Ⅱ和其他基本转录因子与启动子进行有序装配，最后形成一个稳定的起始复合物。;四、调控转录的反式作用因子 能识别或结合在顺式作用元件核心序列上参与调控靶基因转录效率的结合蛋白，称为反式作用因子。 （一）反式作用因子的结构特征 1、DNA识别或DNA结合结构域 2、激活基因转录的功能结构域;3、结合其他蛋白或调控蛋白的调节结构域 ;(二)序列特异性DNA结合蛋白的几种结构域 1．螺旋-转角-螺旋结构 螺旋-转角-螺旋（helix-