黄河兰州段水体中有机污染物对MCF7细胞周期和端粒酶表达的影响.pdfVIP

兰蟋大学矮士学襞论文 中文摘要 Pollutants)为研究对象，通 疆的：本研究以黄河水中的有机污染物(Organic 过检测人乳腺癌MCF．7细胞生长增殖抑制率、细胞周期、端粒酶活性的表达和 细胞内游离钙离子的浓度(【Ca2+】i)，探讨有机污染物的毒性作用及其机制。 方法：分别在黄河兰州段中由桥(污染断面)、什川桥(鲁净断面)和新城 桥(清洁断面)_--个断面进行采样，采用固相萃取法(SPE)对三个断面水样中的 有机污染物进彳亍富集萃取。然骺将MCF．7细胞分为不加任何处理的对照组和经 不同浓度的有机污染物处理的实验组，应用噻唑蓝(MW)比色法检测不同浓 度有机污染物对细胞增殖活性及ICso的影响。在此基础上，利用流式细胞仪检测 有机污染物处理细胞48h后细胞周期分布和细胞凋亡率：逆转录端粒重复序列扩 增(pCR．TRAp)法检测有机污染物对MCF．7细胞端粒酶活性表达的影响；激 光熬聚焦显微镜法检测细胞内[ca2+】i的浓度。 结果： 1、有机污染物对MCF．7细胞生长增殖的影响 用SPE法提取中山桥、什川桥和新城桥三个断面水样中有机污染物的浓度 细胞的细胞增殖抑制率(CPIR)与对照组无明显差别，各组之间变化亦不明显， 说明在此浓度范垂内有枫污染物对缨胞生长增殪基本无抑制馋用：在 度组中，中山桥组的CPIR值最高：经相关性分析，各实验组的有机污染物浓度 从中得到中山桥、什川桥、新城桥三个断面的ICso分别为3．374-0。02mg·ml～、 物对细胞翡增殖抑制作用更为明显。在10。e0．40。00mg-ml《浓度，各实验组对细 胞的生长抑制作用出现饱和，随有机污染物浓度的升高，其细胞生长增殖抑制率 逐渐下降，中山桥组更加显著(Po．01)。 2、有机污染物对MCF．7细胞周期窝凋亡的影响 各断面的有机污染物以1／2IC50处理MCF．7细胞48h后，各组细胞凋亡率明显 I 兰髑大学矮圭拳盈论文 高于对照组(尸0．01)：细胞凋亡率由高到低依次为中山桥组31．43士3．00％、新城 统计学意义(氏O。05)；不同断面各组的细胞周期分布显示：Gl期细胞均值百分 比由高到低依次为：新城桥组84．47士1．67％、什川桥组77．86土O．14％、中山桥组 55．03士3．63％，其西分比均大于55％，提示细胞主峰在Gl期积聚。 3、有机污染物对MCF-7细胞端粒酶活性表达酌影响 PCR-TRAP法检测端粒酶的表达结果表明，不同断面有机污染物分别作用细 胞24h、48h和72h后，不同时点各组的端粒酶灰度值与对照组相比显著降低(氏 O。01)；随其各自作用于细胞时间的延长，各组及相应对照缝的端粒酶条带灰度 值均降低，呈现时间依赖性(P0．05)。 4、细胞内游离钙离子([Ca2+li)浓度的检测 本研究剩用激光共聚焦曼微镜检测缨胞内[Ca2+]it撇度结果显示，有机污染 升高；随着各断砸有机污染物作用时间的延长，细胞内【ca2+】i的浓度随之降低， 呈时闻依赖性。含钙离子细胞强液组和不含钙离子细胞外液组之间在不同时点分 缓冲液换成Hank’S缓冲液时，有机污染物诱导的MCF．7细胞质内【Ca¨】i浓度的升 高被抑制，提示【c鑫；z+】i的增加不是来源于签钙内流。 结论： 黄河兰州段水体中有机污染物在一定浓度范围对细胞有损伤作用，初步探讨 其毒作用机制可能有以下几个方面：(1)黄灞兰州段水体中有橇污染物在中热量 浓度时抑制人乳腺癌MCF．7细胞增殖，并诱导其凋亡。(2)TRAP．银染法可检 测到MCF．7细胞端粒酶活性的表达，黄河兰州段水体中有机污染物在中剂量浓 度时下调体外MCF。7细胞端粒酶活性的表达，其作用机制需进一步探讨。(3) 黄河兰州段水体中有机污染物可诱导MCF一7细胞内[Ca2+】i浓度升高。随作用时 间，其诱导【ca2+】i浓度升高的作用减弱。 关键词：黄河水；有枫污染物；MCF．7细胞；细胞增殖抑制率：细胞凋亡； 端粒酶；激光共聚焦法；细胞内游离钙离子 II