黄曲霉毒素Mlt1gt直接竞争ELISA与无毒体系的建立.pdfVIP

摘要 摘要 黄曲霉毒素(Aflatoxin，简称AF)是真菌的次级代谢产物，主要由黄曲霉、 寄生曲霉和特曲霉产生，广泛存在于花生、棉籽、玉米、小麦和稻米等农产品 中。因AF具有强烈的毒性和致癌性，1993年AF被世界卫生组织(wHO)的癌症 研究机构划定为I类致癌物。AF是一类结构类似化合物，己经分离鉴定出黄曲 霉毒素Bl(Aflatoxin 以AFBl毒性最强，AFMl毒性虽然低于AFBl，然而与氰化钾和砒霜相比，仍属 剧毒物质，为强致癌剂。 为了防止AFM。含量超标的食品尤其是乳制品进入人类食物链，许多国家已 经制定了食品中AFIVll的限量标准。因此，建立一种快速检测AFMl的方法具有 重要意义。 本论文研究的内容主要包括以下两个方面： 1．黄曲霉毒素M1直接竞争ELISA的建立 (1)制各AFMl肟化物，．然后通过活泼酯法将AFIVll肟与辣根过氧化物酶进 行偶联。 以该浓度为基础建立AFMl直接竞争ELISA标准曲线，最低检测下限为 0．1ng／mL，线性范围是0．1ng／ml至4ng／ml，ICso是2．2ng／ml。 2．采用噬菌体随机展示肽库淘选AFMl模拟表位， (1)以抗AFMl单克隆抗体为靶分子，从噬菌体随机7肽库中进行4轮亲和 淘选。从第4轮噬菌平板上随机挑选21个噬菌斑，经间接ELISA和间接竞争 ELISA鉴定，获得了4个能与抗AFMl单克隆抗体结合并且不和封闭液发生交 叉反应的阳性噬菌体克隆，这4号噬菌体均能被黄曲霉毒素M1抑制，分别编号 为A1，A2，A3，A4。 (2)提取上述4个噬菌体的DNA，进行测序。根据噬菌体文库简要遗传密 码将插入的DNA序列翻译成氨基酸序列。A1，A2两号噬菌体插入片段氨基酸 摘要 标准曲线，结果显示两曲线相似，曲线线性范围为O．1-5 ng，mL，IC50为3 ng／mL， 最低检测限度为0．1 n咖L。 关键词：黄曲霉毒素M1；单克隆抗体；活泼酯法；噬菌体展示肽库；模拟表位 Ⅱ AbstraCt Abstract toxic metabolites the secondary mainlyprouducedby fungi Aflatoxins(AF)are and nomiusonfoodsand Aspergillusltavus，AspergillusparasiticusAspergillus the forRessarchoaCancer feedstuffs．AFhasbeenevaluatedInternational by Agency as in becauseoftheirtoxicand ofWHOaclassIhuman 1993 carcinogen tohumansand 20differentof potentials animals．Among types carcinogenic aflatoxins