黄曲霉毒素Blt1gt亲和微柱——荧光快速检测技术研究.pdfVIP

摘 要 本课题设计了不同类型型号的黄曲霉毒素Bl亲和柱，优选出分离效率高、 操作简便适于快速检测的AFTB厂I亲和微柱，改进了黄曲霉毒素Bl提取和净 化方式，建立了黄曲霉毒素Bl亲和微柱．荧光快速、准确检测技术，并在实际样 品检测中得到了验证。主要研究内容和研究结果如下： 1．研制并比较了七种不同类型的黄曲霉毒素Bl纯化微柱，优选出具有分离 高效、操作简便适于快速检测特点的AFTBl．I亲和微柱。采用荧光光度法和高 效液相色谱法对亲和微柱的结合容量、进样条件、淋洗条件、洗脱条件、流速、 稳定性等进行了研究，同时对不同批次微柱的变异性和适用性开展了研究。研究 结果表明：微柱的结合容量25肛啦g，加标回收率为90．00％一92．50％。不同批次 微柱的加标回收率无显著差异，相对标准偏差为2．37％，重复性和稳定性好，能 满足国标检测限量范围内的快速检测要求。 2．改进了黄曲霉毒素Bl提取和净化方式，建立了适合荧光光度法快速、批 量检测的前处理方法。筛选出能成倍增强黄曲霉毒素Bl荧光强度，且十分稳定 的荧光增强剂，提高了检测灵敏度。首次提出了两次荧光测量法，通过两次测量 值扣除杂质背景的影响，通过这种方法不仅能够减少假阳性和假阴性出现的概 率，而且降低了检出限。实验结果表明：对花生、大米、植物油、饲料、玉米等 多种农产品进行实验，批次样品能在20分钟内完成，检测范围是O．3¨非g~25．O ¨眺g，回收率范围为80．0％曲2．0％，相对标准偏差不超过5．32％。 3．应用本研究建立的黄曲霉毒素Bl亲和微柱——荧光快速检测技术对花 生、大米、大豆、玉米、饲料、植物油、醋、酱油等农产品中黄曲霉毒素B。含 量进行测定，同时采用国家标准液相色谱法、荧光分光光度法和现行其它技术方 法同时对上述农产品中黄曲霉毒素B1含量进行比对分析。结果表明，本速测技 术检测结果更准确、快速、稳定、可靠。 关键词：黄曲霉毒素B1；快速检测；亲和微柱；研制；荧光增强 Abstract Inthis new micro—col啪ncharacterized research，ailrlmuno棚nity by王1igh aIldconvelliencewas aIld pllrification perfoHnallce，simplicny deVeloped．Extraction methodsforanatoxindctcctionwerealso a11de腩ctive Bl iIIlpmved．R印id ofanatoxindeteHnination谢吐l micro—colum technoIogy Bl immuno缅mty detection、vasestablished．nledetailsof a11dfluorescence p嘶fication experiment comentsandresultsaI七asfollows： 1． Anewmicro—columcharacterized and byhighpe墒rInaIlce，simplicity convenienceforaflatoxin waS fromseven Blp谢ficationdeveloped self-designed micro·colulllnsbasedon