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麝香活性多肽的基因工程表达 生物化学与分子生物学 硕上生：黎晓天 指导教师：吴文言副教授 摘要 以我国传统名贵中药麝香为研究对象，综合应用分子生物学、层析纯化技术 和生物信息学的分析方法和技术手段，埘实验室发现的具有抗炎潜力的麝香活性 多肽进行基因工程表达的研究，以期进一步丌发麝香活性蛋白。 JS、 nsx26共五个克隆。(1) pTwlnlcsx26、pTwinlncsx27、pTwinlcsx27和pTwinl nsx26hiS和 dnaB的下游，分别构建p11winl 将目标基因sx26融合到内含肽ssp nsx26表达载体，前者为方便纯化和检测融合了一段组氨酸标签，利用 pTwinl 镍离子会属鳖合层析杜和几丁质亲和层析柱进行了纯化的摸索，获得单一目标多 肽；后者利用儿J‘质亲和层析柱对可溶的融合蛋白纯化后也获得大量的目标多 肽。(2)将目标基因sx26融合到内含肽mxe csx26表达 gyrA上游构建pTwinl 载体，后者表达获得大量的町溶融合蛋白，经过DTT的诱导后剪接释放出数量可 DnaB和Mxe 观的目标多肽。(3)将目标多肽s￥2占融合到两个内含肽Ssp GyrA csx27。为 中问构建pTwin卜ncsx27，融合到内含肽MxeN端构建pTwinl GyrA 了获得环状的目标多肽，需在目标多肽的N端添加一个半胱氨酸，从而使SX26 ncsx27表达以包涵体为主，并且利用率较低，不利于下游纯 变为SX27。pTwinl 后释放出带有活化巯酯基团的目标多肽，c端的巯酯基团与N端的半胱氨酸能白 发形成肽键，从而获得环状蛋白。初步推断已获得环状蛋白或多个SX27的串联 平。． 总之，本实验成功获得大量的SX26煎组多肽，可为后续的药理试验提供大 量榉晶；并全面摸索pTwinl内含肽表达系统各种不同策略的表达情况，系统建 立起裁雳痰含淑表达系统蓠散表达毫纯瘦小获静技术孚台，为程雳每镪技术开发 传统中药活性肽提供新的途径。 关键词：痃蓉，内含骚，窘蘩接，敲合表达 Genetic ofanactive expression peptide from musk andmolecular Biochemistry biology LIXiaotian WU Supervisor：associateprofessorWenyan Abstract Onthe basisofpotential discovered anti-in