牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备及其蛋白-中国药科大学学报.PDFVIP

学 报 １７６ ＪｏｕｒｎａｌｏｆＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ　２０１６，４７（２）：１７６－１８１ 牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备 及其蛋白柱载量的研究 武　苏，王　伟，季一兵 （中国药科大学分析化学教研室，南京２１０００９） 摘　要　蛋白质柱载量的测定对优化蛋白质类手性整体柱的制备条件具有重要意义。采用热引发原位聚合方法制备了聚 甲基丙烯酸缩水甘油酯（ＧＭＡ）乙二醇二甲基丙烯酸酯（ＥＤＭＡ）液相整体柱，而后采用环氧法直接键合手性选择剂牛血清 白蛋白（ＢＳＡ），制得高效液相手性整体柱，并且建立考马斯亮蓝（ＣＢＢ）法测定手性整体柱上的蛋白柱载量。结果显示，ＢＳＡ 最大的柱载量为１１９０ｍｇ／ｇ，此时致孔剂组成为环己醇十二烷醇（６５∶３５）。将制备的高效液相手性整体柱用于色氨酸和 华法林的拆分，色氨酸的两个对映异构体达到基线分离。高效液相手性整体柱的蛋白柱载量与手性拆分的效果呈现正 相关。 关键词　高效液相手性整体柱；牛血清白蛋白；考马斯亮蓝法；蛋白柱载量；手性拆分 中图分类号　Ｏ６５７　　文献标志码　Ａ　　文章编号　１０００－５０４８（２０１６）０２－０１７６－０６ ｄｏｉ：１０．１１６６５／ｊ．ｉｓｓｎ．１０００－５０４８ 引用本文　武苏，王伟，季一兵．牛血清白蛋白键合的液相手性整体柱制备及其蛋白柱载量的研究［Ｊ］．中国药科大学学报，２０１６，４７（２）： １７６－１８１ Ｃｉｔｅｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅａｓ：ＷＵＳｕ，ＷＡＮＧＷｅｉ，ＪＩＹｉｂｉｎｇ．Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｃｈｉｒａｌｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃｃｏｌｕｍｎａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅｉｎ ｂｏｎｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙ［Ｊ］．ＪＣｈｉｎａＰｈａｒｍＵｎｉｖ，２０１６，４７（２）：１７６－１８１ Ｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍ ａｌｂｕｍｉｎｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｃｈｉｒａｌｍｏｎｏｌｉｔｈｉｃｃｏｌｕｍｎ ａｎｄｉｔｓｐｒｏｔｅｉｎｂｏｎｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙ  ＷＵＳｕ牞ＷＡＮＧＷｅｉ牞ＪＩＹｉｂｉｎｇ ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＡｎａｌｙｔｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ牞ＣｈｉｎａＰｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ牞Ｎａｎｊｉｎｇ２１０００９牞Ｃｈｉｎａ Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｅｘａｃｔｔｏｔａｌｐｒｏｔｅｉｎｂｏｎｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙｉｓｏｆｔｅｎａｋｅｙｓｔｅｐｉｎｔｈｅｐｒｅｐａｒａｔｉｏｎｏｆｐｒｏｔｅｉｎ ｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄｃｈｉｒａｌｍｏｎｏｌｉｔｈＩｎｔｈｉｓｓｔｕｄｙ牞ｗｅｄｅｖｅｌｏｐｅｄａｎｄｅｖａｌｕａｔｅｄａｂｏｖｉｎｅｓｅｒｕｍａｌｂｕｍｉｎ牗ＢＳＡ牘ｍｏｄｉｆｉｅｄ ｍｏｎｏｌｉｔｈｂａｓｅｄｏｎｇｌｙｃｉｄｙｌｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ牗ＧＭＡ牘ａｎｄｅｔｈｙｌｅｎｅｄｉｍｅｔｈａｃｒｙｌａｔｅ牗ＥＤＭＡ牘ｆｏｒｃｈｉｒａｌｓｅｐａｒａｔｉｏｎＴｈｅ ｅｐｏｘｙｇｒｏｕｐｓｏｆｔｈｅｐｏｌｙｍｅｒｗｅｒｅｕｓｅｄｄｉｒｅｃｔｌｙｆｏｒｔｈｅｃｏｖａｌｅｎｔｂｏｎｄｉｎｇｏｆＢＳＡＡＣｏｏｍａｓｓｉｅｂｒｉｌｌｉａｎｔｂｌｕｅ 牗ＣＢＢ牘ｐｒｏｔｅｉｎａｓｓａｙ牗Ｂｒａｄｆｏｒｄｍｅｔｈｏｄ牘ｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎｂｏｎｄｉｎｇｑｕａｎｔｉｔｙ牞ａｎｄｔｈｅｉｎｆｌｕ ｅｎｃｅｏｆｓｏｍｅｋｅｙａｓｐｅｃｔｓｓｕｃｈａｓｉｏｎｉｃｓｔｒｅｎｇｔｈ牞ｐＨｖａｌｕｅａｎｄｒｅａｃｔｉｏｎｔｉｍｅｗｅｒｅｓｔｕｄｉｅｄＴｈｅｍｅｔｈｏｄｗａｓｖａｌｉｄａ ｔｅｄｗｉｔｈｒｅｓｐｅｃｔｔｏｌｉｎｅａｒｉｔｙ牞ｐｒｅｃｉｓｉｏｎ牞ａｃｃｕｒａｃｙａｎｄｒｏｂｕｓｔｎｅｓｓＴｈｅｍａｘｉｍｕｍａｍｏｕｎｔｏｆｉｍｍｏｂｉｌｉｚｅｄＢＳＡｗａｓ １１９０ｍｇ／ｇ牞ｏｂｔａｉｎｅｄｕｓｉｎｇ６５∶３５ｃｙｃｌｏｈｅｘａｎｏｌ／ｄｏｄｅｃａｎｏｌａｓｔｈｅｐｏｒｏｇ