不能编码蛋白质②有调控遗传信息表达的核苷酸序列.ppt

1-2：基因工程的基本操作程序 主要是编码蛋白质的结构基因 * * 专题1：基因工程 一 基因工程的原理 1、概念： 按照人们的意愿，把一种生物的某种基因提取出来，加以修饰改造，然后放到另一种生物的细胞里，定向地改造生物的遗传性状。 基因工程的别名 结果 基本过程 操作水平 操作对象 操作环境 实质 基因拼接技术或DNA重组技术 生物体外 基 因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 人工（基因重组） 原核细胞的基因结构 非编码区 非编码区 编码区 编码区上游 编码区下游 与RNA聚合酶结合位点 启动子 终止子 ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质 ：能转录相应的信使RNA，能编码蛋白质 编码区 非编码区 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列： 启动子、 一段有特殊结构的DNA片断，基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合部位，驱动基因转录——启动子 终止子 一段有特殊结构的DNA片断，基因的尾端，使转录终止——终止子 真核细胞的基因结构 编码区 非编码区 非编码区 与RNA聚合酶 结合位点 内含子 外显子 启动子 终止子 编码区上游 编码区下游 编码区 非编码区 能编码蛋白质的序列 非编码序列： 包括非编码区和内含子 不能编码蛋白质的序列 内含子： 外显子： ①不能转录为信使RNA，不能编码蛋白质 ②有调控遗传信息表达的核苷酸序列： 启动子、 终止子 都由能够编码蛋白质的______和具有调控作用的______区组成的 相同点 编码区是间隔的、_____的 编码区是 _____的 不同点 真核细胞 原核细胞 原核细胞与真核细胞的基因结构比较 思考 编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因结构一样长吗？ 连续 不连续 编码区 非编码 基因工程基本操作的四个步骤 1、目的基因的获取 2、基因表达载体的构建 3、将目的基因导入受体细胞 4、目的基因的检测与鉴定 一、目的基因的获取 初始目的基因的来源 1. 从生物中直接获取 2. 人工合成 基因工程基本操作的步骤 也可以是一些具有调控作用的因子 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 注意：要保持基因的完整性 　用限制酶切断成许多片段 1.直接分离基因——鸟枪法（散弹射击法） 运载体 供体细胞中DNA 许多DNA片段 载入 导入 受体细胞 产生特定性状 目的基因 分离 外源DNA 扩增 　　该法最大的缺点是带有很大的盲目性，工作量大，成功率低。 　用限制酶切断成许多片段 　用限制酶切断成许多片段 用限制酶将供体细胞中的DNA切成许多片段，将这些片段分别载入运载体，然后通过运载体分别转入不同的受体细胞，让供体细胞提供的外源DNA的所有片段分别在各个受体细胞中大量复制（即扩增），从中找出含有目的基因的细胞，再利用一定的方法将目的基因的DNA片段分离出来。 目的基因的mRNA 单链cDNA 反转录 双链DNA （即目的基因／双链cDNA） 合成 (1)反转录法 蛋白质的氨基酸序列 mRNA的核苷酸序列 结构基因的核苷酸序列 目的基因 推测 化学合成 推测 2.人工合成基因法 (2)根据已知的氨基酸序列合成DNA法 合成的基因中均无内含子和启动子 杂交双链（RNA-DNA) 核酸酶H 上述三种目的基因提取的方法有何优缺点？ 根据已知氨基酸合成DNA法 反转录法 鸟枪法 缺点 优点 操作简便广泛使用 工作量大，盲目，分离出来的有时并非一个基因 专一性强 操作过程麻烦，mRNA很不稳定，要求的技术条件较高 专一性强 仅限于合成核苷酸对较少的简单基因 现在常用的获得目的基因的方法有哪些呢？ 1、从基因文库中获取目的基因 将含有某种生物不同基因的许多DNA片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。 　　　　基因文库 （gene library） 基因组文库 部分基因文库（如cDNA文库） 基因组文库: 包含了一种生物所有的基因的基因文库 部分基因文库: 包含了一种生物的一部分基因的基因文库 如何从基因文库中得到所需要的基因？ 依据：目的基因的有关信息 如：根据基因的核苷酸序列 基因的功能基因在染色体上的位置 基因的转录产物mRNA 基因翻译产物蛋白质 等特性。 是否一定要构建基因文库？ 未知目的基因序列时 已知目的基因序列时 2、人工合成： 基因比较小，核苷酸序列已知 DNA合成仪 3、PCR技术扩增目的基因： PC