第三章 海洋细胞培养设备和设置.ppt

细胞培养实验室的功能区 无菌操作区 培养区 制备区 储藏区 清洗和消毒灭菌区 无菌操作区?  无菌操作区只限于细胞培养及其他无菌操作的区域，最好能与外界隔离，不能穿行或受其他干扰。? 更衣室—供更换衣服、鞋子及穿戴帽子和口罩。? 缓冲间—位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境，同时可放置恒温培养箱及某些必需的小型仪器。? 无菌操作间—专用于无菌操作、细胞培养。其大小要适当，且其顶部不宜过高（不超过2.5m）以保证紫外线的有效灭菌效果；墙壁光滑无死角以便清洁和消毒。工作台安置不应靠墙壁，台面要光滑压塑作表面，漆成白色或灰色以利于解剖组织及酚红显示pH的观察。? 无菌操作间的空气消毒：? 紫外线灯—－产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。? ? 2．培养区? 本区对无菌的要求虽不比无菌区严格，但仍需清洁无尘，因此也应设置在干扰少而非来往穿行的区域。孵育可在孵箱或可控制温度的温室中进行，后者费用高，一般实验室多采用孵箱进行工作。? 3．制备区? 在该区主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。? 4．储藏区? 主要存放各类冰箱、干燥箱、液氮罐、无菌培养液、培养瓶等，此环境也需要清洁无尘。? 5．清洗和消毒灭菌区? 清洁和消毒灭菌区应与其他区域分开，主要进行所有细胞培养器皿的清洗、准备、消毒及三蒸水制备等工作。? 生物安全柜 超净工作台的使用方法 避免日光直射、清洁无尘的房间内。 使用前擦洗台面。 提前30min开启超净台内紫外灯消毒 使用完毕后，将物品收拾擦拭干净 超净工作台的无菌程度检查超净工作台在消毒处理后，无菌试验前及操作过程中需检查空气中菌落数；取直径约90mm平皿，在超净工作台内点燃酒精灯，在酒精灯旁，以无菌操作，将平皿半开注入溶化的营养琼脂培养基约20ml，制成平板，在30～35℃预培养48小时，证明无菌后将平板3个，以无菌方式带入超净工作台内左、中、右各放一个；打开平皿盖扣置，平板在空气中暴露30分钟后将平皿盖盖好，置30～35℃培养48小时，取出检查，100级清洁度要求：3个平皿上生长的菌落数平均不得超过1个。 超净工作台的保养方法 1. 超净工作台安装在清洁无尘的房间内，最好为隔离好的无菌间内，以免尘土过多易使滤器堵塞，降低净化效果，缩短使用寿命。 2. 超净工作台内不应放置其他与细胞培养无关的用品，更不能用做储存室存放不必要的物品，以保持洁净气流流型不受干扰。 3. 停止使用时最好用防尘布或塑料布套好，避免灰尘积累。 4. 不设在无菌操作区内经常使用的超净台，要注意过滤器的效果。一般3~6个月拆下清洗一次，2~3年更换一次，以保持过滤器的净化效果。 倒置显微镜的使用方法 放置必须平稳。 打开电源，将灯光强度从最低开始，调制合适的强度。 将培养瓶放在载物台上 调焦，调至出现完全清晰的物象 倒置显微镜的保养方法 1. 用后要用软刷或纱布除去灰尘。 2. 去除指纹和油迹，用酒精、乙醚混合液或二甲苯擦拭。 3. 勿随便拆卸。 4. 仪器应放在干燥的地方，物镜和目镜放在有干燥剂的密封容器内。 恒温培养箱的使用方法 检查电源，与培养箱所需电压一致时可插上电源。否则，使用调压器。 打开电源，调节温度，。 经常观察箱上的温度计，看箱内温度是否与培养温度相符。 CO2培养箱的使用方法 减压器安装在CO2气瓶阀上， 调节减压器，使低压表指针指到0.06MPa, 松开进气管口，使CO2 流入箱内。 CO2培养箱的保养方法 1. 为了避免污染，要定期消毒 2. 箱内水槽加1/3~1/2体积的灭菌蒸馏水。 3. 尽量减少开关箱门次数，减少CO2消耗 冰箱的保养方法 1. 冰箱与墙壁之间留一定距离，利于散热 2. 温度过高物品不能立即放入冰箱，以免增加冰箱的工作时间，降低使用寿命。 3. 尽量减少开关箱门次数和每次开门时间 4.冰箱内物品不易反复冻融，以免影响其活力或品质，短时间停电不易打开冰箱取物品。 定期除霜 干燥箱的使用方法 一般需达到160℃以上。 升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至100℃时，停止鼓风，应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦。 消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至100℃以下方可开门。 高压蒸汽灭菌锅的使用方法 加蒸馏水，水位一定要超过电热管2cm以上，但不宜过多。 待灭菌的物品妥善包扎，各包之间留有空隙，利于高压蒸汽的穿透，提高灭菌效果。 要求温度121℃，时间15~30min. 当压力表指针回复至零位时，方可将锅盖盖打开。 离心机的使用方法 在使用离心机前必须将其放置在平稳、坚固的台面上。 将试管平衡后对称放入离心机中，盖上离心机盖。