第八章、反胶团萃.ppt

第八章、反胶团萃取 （反胶束萃取） 1 基本术语 反胶束(reverse micelles): 若向有机溶剂中加入一定浓度S，在有机溶剂中所会形成胶束。当形成反胶束时，水在有机相中的溶解随[S]线性增大。因此，可通过测定有机相中平衡水浓度的变化，确定形成反胶团的最低表面活性剂浓度。 反胶束的形态：球形或近似球形，也呈柱状。 极性核(polar core): S分子的自组装形成了极性核。 微水相或“水池”(water pool)：反胶束内溶解的水。 一、概述 反胶团(Reversed Micelles)是两性表面活性剂在非极性有机溶剂中亲水性基团自发地向内聚集而成的，内含微小水滴的，空间尺度仅为纳米级的集合型胶体。是一种自我组织和排列而成的，并具热力学稳定的有序构造。 反胶团的微小界面和微小水相具有两个特异性功能： (1)具有分子识别并允许选择性透过的半透膜的功能； (2)在疏水性环境中具有使亲水性大分子如蛋白质等保持活性。 反胶团萃取的优点 (1)有很高的萃取率和反萃取率并具有选择性； (2)分离、浓缩可同时进行，过程简便； (3)能解决蛋白质(如胞内酶)在非细胞环境中迅速失 活的问题； (4)由于构成反胶团的表面活性剂往往具有细胞破壁功效，因而可直接从完整细胞中提取具有活性的蛋白质和酶； (5)反胶团萃取技术的成本低，溶剂可反复使用等。 二、反胶团的形成 1、反胶团的构造： 在胶体化学中我们知道，如向水溶液中加入表面活性剂，并使其浓度超过一定数值时，表面活性剂就会在水相中形成胶体或微胶团，它是表面活性剂的聚集体。其亲水性的极性端向外指向水溶液，疏水性的非极性“尾”向内相互聚集在一起。 当向非极性溶剂中加入表面活性剂，并使其浓度超过一定数值时，也会在非极性溶剂内形成表面活性剂的聚集体。与在水相中不同的是，其疏水性的非极性尾部向外，指向非极性溶剂，而极性头向内，与在水相中形成的微胶团方向相反，因而称之为反胶团或反向胶团。 几种可能的表面活性剂聚集体的微观构造。 表面活性剂的类型： 1、阴离子型； 2、阳离子型； 3、非离子型。 分离蛋白质时， 使用最多的是阴离子型表 面活性剂AOT。 2 基本性质 AOT反胶团直径dAOT: 常用于制备反胶束的S是二-(2-已基已基)琥珀酸酯磺酸钠,商品名为Aerosol OT, 即AOT。其在异辛烷中形成反胶团dAOT: 第1项为水核直径，第二项(2*1.2 nm)为二倍AOT分子长度. 一般反胶团的W0不超过40. 因此, 依据上式, 利用ATO形成的水核直径一般不超过12nm, 大致可容纳一个直径为5-10nm的pro分子. 当pro分子比与反胶团直径相比大得多时(如,当M 100-200kD),难于溶解到反胶团中. 3 反胶束的溶解作用 微水池溶解和分离作用： 反胶团的微水池的水可溶解氨基酸、肽和蛋白质等生物分子, 为生物分子提供易于生存的亲水微环境. 因此,反胶团萃取可用于氨基酸、肽和蛋白质等生物分子的分离纯化，特别是蛋白质类生物大分子。 蛋白质溶解模型： a、水壳模型：蛋白质位于水池的中心，周围存在的水层将其与反胶团壁隔开； b、半岛模型：pro表面存在强烈疏水区，该区直接与有机相接触； c、pro吸附于反胶团内壁； d、pro疏水区与几个反胶团的S疏水尾发生相互作用，被几个小反胶团所“溶解”。 3 反胶束的溶解作用 溶解推动力 A 静电作用： 理论上,当溶质所带电荷与表面活性剂相反时,由于静电引力的作用,溶质易溶于反胶团,溶解率或分配系数较大,反之,则不能溶解到反胶团相中, 左图为pH值对不同蛋白质的溶解率急剧变化,当pH ,即在带正电荷的pH范围内蛋白质的溶解率接近100%,说明静电相互作用对蛋白质的反胶团萃取起决定性作用。 3 反胶束的溶解作用 B 空间相互作用 盐浓度增大对反胶团相产生脱水效应, 含水率W0随盐浓度的增大而降低,反胶团直径减小, 空间排阻作用增大, pro溶解下降. 如，AOT/异辛烷系统的含水率与I-0.5成正比。图中W0与NaCl浓度关系为: 图还示：AOT/异辛烷系统的含水率与AOT浓度无关,这是多数反胶团系统的共性. 在各pro的pI处(排除了静电相互作用的影响)，反胶团萃取实验研究表明: 随着M增大, pro的分配系数(m, 溶解率)下降。当M 20KD时, m很小. 表明随M增大, 空间排阻作用增大, pro的溶解率降低. 图的结果还表明, 要据pro间M的差别可以选择性对pro进行萃取分离。 C 疏水性相互作用 aa的疏水性各不相同, 研