分子生物学实验大纲.docVIP

云南师大?生命科学学?学院 ? ?分子生物学综合实验课程教学大纲 ? 【课程名称】分子生物学综合实验（ 英文 ）Experiment of Molecular Biology 【课程编码】 【课程类别】专业主干课程 【课??? 时】 34 【学??? 分】 1 ? 【课程性质、目标和要求】 （课程性质） ?专业主干课程 ? （教学目标） ?分子生物学是实践性强，对实验仪器要求较高的课程，因此开设本课程的目的是使学生掌握分子生物学实验设备的操作方法，具备应用现代生物技术的手段，研究生物大分子初步能力，学会发现问题和解决问题的基本技能，为毕业后从事生命科学相关的科研和教学工作奠定基础。 （教学要求） ? 注重培养学生发现问题和解决问题的能力，学习规范化的操作技能，培养求实创新的科学精神。 ? ??? 【教学时间安排】 ? 　　本课程计?1 学分，?34 学时, 学时分配如下： ? ? 序号 实验名称 实验类型 课时 备注 1 分子生物学预备实验 验证 1 2 质粒DNA的提取及酶切 验证 6 3 琼脂糖凝胶电泳检测DNA 验证 6 4 哺乳动物DNA的提取 验证 9 5 人淋巴细胞株DNA提取及MTHFR 667位点扩增 综合 12 ? ? ??? 【教学（实验）内容要点】 ?实验一 分子生物学预备实验 （1）实验要求 ①通过介绍实验室规则，规范学生在实验室的行为； ②讲解个相关仪器的名称，用途，简单原理和使用方法，让学生学会对它们的操作方法。 （2）实验内容 ①学习实验室规则； ②学习电子称量设备、离心机； ③学习PCR仪； ④学习电泳仪； ⑤学习紫外透射仪； ⑥学习微量加样器 ⑦学习制冰机； ⑧根据各溶液的浓度和用量，计算出各种药品的称取量； ⑨学会配制各种试剂； ⑩学会高压湿热灭菌。 （3）主要仪器 电子称量设备、离心机、PCR仪、电泳仪、紫外观测仪、微量加样器、制冰机、烧杯、量筒、容量瓶、三角瓶、试剂瓶、高压灭菌锅。 实验二 质粒DNA的提取及酶切 （1）实验要求 通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒。 （2）实验内容 提取质粒； ②溶解保存； ③酶切； ④电泳、染色、检测质粒DNA。 （3）主要仪器 台式离心机、高压灭菌锅、恒温水浴锅、旋涡振荡器、电冰箱、微量加样器、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪。 实验三 琼脂糖凝胶电泳检测DNA （1）实验要求 通过实验掌握琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。 （2）实验内容 ①胶板的制备； ②加样； 电泳； 染色、观察分析DNA。 （3）主要仪器 琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪、微量加样器。 实验四 哺乳动物基因组DNA的提取 （1）实验要求 ①通过本实验了解并掌握提取基因组DNA的原理和步骤，以及相对分子量较大的DNA的琼脂糖凝胶电泳技术。 （2）实验内容 ①小鼠肝脏匀浆； ②酶解细胞过夜。 ③酚/氯仿/异戊醇抽提； ④无水乙醇抽提 ⑤冷乙醇洗涤； ⑥缓冲液溶解； ⑦电泳； ⑧染色、观察分析小鼠DNA。 （3）主要仪器 玻璃匀浆器、台式离心机、高压灭菌锅、恒温水浴锅、旋涡振荡器、低温电冰箱普通电冰箱、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪。 实验五 人淋巴细胞株DNA提取及MTHFR 667位点扩增 （1）实验要求 通过本实验学习人淋巴细胞株的培养， 学习人淋巴细胞株DNA的提取。 学会PCR反应的基本原理与实验技术。 （2）实验内容 ①人淋巴细胞株的培养； ②人淋巴细胞株DNA提取； ③配制反应体系及设置PCR仪的各项参数； ④利用特定引物，扩增目的DNA片段（MTHFR 667位点）； ⑤琼脂糖凝胶电泳检测分析。 （3）主要仪器 超净工作台（间）、高压灭菌锅、CO2培养箱、磁力搅拌器、微孔过滤器、倒置显微镜、烧杯、量筒、容量瓶、三角瓶、试剂瓶、PCR仪、微量加样器、琼脂糖凝胶电泳系统、紫外线透射仪。 【成绩考核方式】 ?1、成绩评定总则 ?单独考核，与理论课成绩无关。以平时实验作业成绩的平均分作为课程结业成绩，或采用抽查实验、理论考试的方式。 ?2、平时成绩评定 ?实验操作、课堂提问、实验报告 ? ?3、期末考核评定 ?口试 ? 【教材与参考书目】 ?指定教材： 《细胞生物学实验指导》，李素文主编，高教出版社，2003，北京 ?《分子生物学实验指导》 魏群主编 高教出版社、施普林格出版社 1999 ?参考书目： 1、 刘鼎新. 1997. 细胞生物学研究方法与技术（第二版）. 北京: 北医/协和医大联合出版社. 2、杨汉民. 1997. 细胞生物学实验（第二版）. 北京: 高等教育出版社. 3、D. L.斯佩克特等（黄培堂等译）. 2001. 细胞实验指南（上、下）. 北京: 科学出