从而实现流动相高速移动时固定相的保留2高速逆流色谱法.PPT

K ＝ Cs/Cm 白花前胡提取物的HSCCC分离 实例1 利用HSCCC分离标准蛋白质混合物 紫薯花青素的HSCCC分离 为旋花科(Convolvulaceae)，番薯(Ipomoea batatas (L.)Lam.)的一年生草本植物。 1 化学成分 花色素类化合物 黄酮及酚类化合物 2 药理作用 抗氧化作用 抗肿瘤作用 降血糖作用 促进改善心血管系统作用 与HPLC比较,其优点是溶剂酸度选择范围大,长时间适用低pH值的溶液对分离效果没有很大影响，且无仪器损耗。 Fan Qiu,Jianguang Luo,Shun Yao,Li Ma, Lingyi Kong* J. Sep. Sci. 2009, 32(12):2146-2151 室温下，200 mg样品溶于4 ml下相,转速880 rpm，流速1.5 mL/min，检测波长520 nm，使用叔丁基甲醚－正丁醇－乙腈－水－三氟乙酸（1:4:1:5:0.01）系统，以上相为固定相，下相为流动相洗脱。 B1 B2 B3 A1 A2 A3 HSCCC图谱 HPLC图谱 不同产地丹参提取物 　 高速逆流色谱法是中药指纹图谱发展的一个新方向 溶剂体系：石油醚-丙酮-水（3:3:2,v/v）样品：250mg 环孢菌素粗品检测条件：ELSD 环孢菌素 A－98.6%，90.2%(收率) 环孢菌素 C－99.3％，85.0%(收率) 环孢菌素 B－98.7％，88.5%(收率) 环孢菌素 D－98.5％，86.3%(收率) 实例1 环孢菌素粗品 HSCCC在抗生素分离纯化中的应用 溶剂体系：正己烷-乙酸乙酯-甲醇-0.5％氨水 (3:7:5:6,V/V） 检测器：ELSD；进样量：300mg 红霉素A和C含量均在98％以上 实例2 红霉素 HSCCC在抗生素分离纯化中的应用 1 2 3 溶剂体系：PEG1000-磷酸盐体系-水＝14-16-70(%,w/w) 样品：1mg 细胞色素C、 20mg 溶菌酶、5mg 血红蛋白 1.Cytochrome C; 2.Lysozyme ; 3.Hemoglobin (反转出峰，上相为流动相) 色谱，2005,Vol.23 No.1 12～17 HSCCC在蛋白质分离纯化中的应用 溶剂体系：PEG1000-磷酸二氢钾-水＝15-17-68(%,w/w)样品：1mg 细胞色素C、8mg 肌红蛋白、20mg溶菌酶 1.Cytochrome C; 2.Myoglobin 3.Lysozyme 实例2 利用HSCCC分离标准蛋白质混合物 HSCCC在蛋白质分离纯化中的应用 主要内容 高速逆流色谱法原理 1 高速逆流色谱法优点 2 高速逆流色谱仪应用 3 高速逆流色谱仪操作模式 4 实例1 藤黄酸异构体的分离 溶剂系统: 正己烷-甲醇-水 (5:4:1) 流动相：下相 流速: 2.0 ml min-1 转速：900 rpm 样品量：50 mg 固定相保留： 50% 分离温度: 25?C A. gambolic acid 97.2% B. epigambolic acid 97.5% 闭合回路系统 Journal of Chromatography A, 2006, Volume 1127, 298-301 HSCCC应用-闭合回路　 1 现代几乎所有的逆流色谱仪器都可以追溯到20世纪50年代的非连续逆流分溶装置，该装置由一系列分液漏斗连接而成。此多级萃取设备庞大复杂，易碎，溶剂体系容易乳化，溶剂消耗量大，分离时间长。很快在20世纪60年代被液相色谱代替。 2 20世纪70年代初出现液滴逆流色谱（DCCC）：该技术结合了逆流分溶和液相色谱的优点，被命名为逆流色谱。基于流体静力学原理，分离时间过长，连接处容易出现渗漏等。 3 20世纪70年代末出现了离心分配色谱（CPC）：该技术基于流体静力学原理，利用公转产生的单一力场，连接处较多而且容易出现渗漏，清洗维护复杂。 前面提到CPC是利用公转产生的单一力场，而HSCCC是通过同步行星式运动产生的二维力场，保留两相中的其中一相作为固定相。 这张图说明物质为何得以分离 实验过程中，还需要工作站和氮气或空气压缩机 分离两个黄酮和一个内酯类化合物 300A Waters RPLC systme; A YWG C18(200mm*10mm, 10μm) 20A 2.5ml/min 以下相为固定相，我们在低转速下实现比DE高转速下更好的分离度。 芫荽 yansui 中药指纹图系指中药经适当处理后，采用一定的分析手段（光谱和色谱）得到的能够标示该中药特性的共有峰的图谱 中药成分复杂，指纹图谱是中药质量控制