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外科学(普外)专业毕业论文 [精品论文] 重组生长激素对手术创伤和腹腔感染时白蛋白合成率影响的研究 关键词：重组生长激素 手术创伤 腹腔感染 白蛋白 合成率 脓毒症 摘要：第一部分示踪技术测定白蛋白合成率相关方法的建立 目的： 完善白蛋白提纯和水解等方法；确定苯丙氨酸在气相色谱质谱联用仪GC/MS下检测条件和分析方法；建立稳定性同位素示踪剂测定白蛋白合成速率的方法。 方法： 1．血清白蛋白采用三氯乙酸/乙醇法提纯，SDS鉴定纯度，Bradford法定量；采用HPLC法对水解液氨基酸进行定量，固相萃取法对苯丙氨酸衍生前进行处理。 2．应用MSTFA对氨基酸进行衍生化，选取庚烷作为溶剂，GC自动进样lul。 3．与谱库进行对比，确定衍生化产物的特征片段，对质核比M+5，M+2和M+0的积分面积进行比较，确定相对丰度表达方法。 4．白蛋白合成率分数测定用标准曲线法，再根据随时间推移白蛋白和前体池中同位素相对丰度TTR的变化，计算FSR。 结果： 对提纯后血浆白蛋白进行SDS，发现在66KD处有纯度较高条带；Bradford法测定白蛋白浓度为0.9mg/ml；HPLC法测定水解液中氨基酸浓度为0.6umol/L；衍生化产物为化产物为N，O-双三甲基硅炕基-L-苯丙氨酸和N，O-双三甲基硅烷基-[2H5]-L-苯丙氨酸；选取质核比197/194作为相对丰度TTR指标：前体池中苯丙氨酸TTR在输注实验后1h达到平台期，此时并入白蛋白苯丙氨酸TTR的增加成线性，基于此计算出的正常新西兰兔在给予肠外营养情况下的白蛋白合成率分数为17.26±0.92(n=8)。 结论： 1．白蛋白的提纯和水解方法以及氨基酸衍生化方法达到测定白蛋白FSR的要求。 2．用于测定稳定性同位素示踪剂的GC/MS条件稳定，分析数据方法可靠。 3．稳定性同位素示踪剂[2H5]-L-苯丙氦酸测定白蛋白合成率分数的方法可行，为进一步评估手术和感染等应激时白蛋白合成速率变化提供技术支持。 第二部分生长激素对手术创伤和腹腔感染时白蛋白合成率的影响 目的： 改良盲肠结扎穿孔的新西兰兔模型，建立取血和营养输注途径；通过已建立的稳定性同位素示踪技术评估腹腔感染和手术应激对动物白蛋白合成率分数的影响；评估重组人生长激素对腹腔感染持续状态白蛋白合成代谢的作用。 方法： 1．腹腔感染模型的制作采用改良后的盲肠结扎穿孔法，腹腔感染引流术去除腹腔感染，颈外静脉置管和弹簧固定的方法分别用于取血和营养液的输注。 2．新西兰兔随机分为四组，即正常合成率组、假手术组、腹腔感染组和生长激素干预组；腹腔感染组和生长激素干预组在第一次同位素输注实验结束后实施腹腔感染引流术；四组动物均给予全胃肠外营养支持(TPN)；分别在术前、术后第1天和第4天对一般指标(体重，血清白蛋白浓度等)进行检测。 3．生长激素干预组于第一次输注实验后每晚0：00给予肌肉注射生长激素0.3u/kg，其他组给予安慰剂。 4．稳定性同位素标记物[2H5]L-苯丙氨酸注射液经灭菌和除热源处理，根据体重计算给药剂量，将同位素混入肠外营养中经耳缘静脉微量注射泵输入体内。自稳定性同位素输注实验开始后，每小时取血3ml，直至6小时后实验结束。 5．白蛋白合成率分数测定用标准曲线法，根据随时间推移并入白蛋白和前体池中同位素相对丰度TTR的变化，计算FSR，并进行组内和组间比较。 结果： 本研究发现盲肠结扎穿孔术后1天，新西兰兔腹腔粘连较重，肠系膜和肠管充血水肿，腹腔有脓性积液；取血和营养输注方法可有效维持4天以上；对动物体重和血清白蛋白浓度的变化进行了观察，发现腹腔感染组第4天体重和血清白蛋白浓度较术前显著下降(p值分别为0.037和0.001)；各组实验动物白蛋白FSR的组内比较，发现生长激素组FSR第4天显著高于第1天(p=0.006)；四组实验动物自蛋白FSR的组间比较，发现第1天四组间FSR有差异(F=33.687，p＜0.001)，其中假手术组、腹腔感染组和生长激素组的FSR均较正常组高(p＜0.05)；腹腔感染组和生长激素组较假手术组高(p＜0.001)；第4天四组间FSR差异显著(F=65.794，p＜0.001)，腹腔感染组高于正常组(p=0.001)和假手术组(p=0.002)；生长激素组则高于其他三组(p＜0.001)。 结论： 1．改良后的盲肠结扎穿孔术可有效的形成腹腔感染，取血和输注装置的改良可以满足实验需要。 2．手术和腹腔感染应激早期白蛋白合成率加快，两者的叠加效应可将白蛋白合成与分解代谢率推向更高的水平。 3．手术和腹腔感染应激持续期白蛋白合成率仍处于高水平，但由于分解速率处于更高水平，机体不能维持此时血