dual-luciferase报告基因检测系统简明操作步骤.pdfVIP

GoScriptTM反转录系统简明操作指导 注意：这是节选操作步骤，详细英文说明书见 适用产品目录号：A5000, A5001, A5003, A5004 /protocols/ GoScriptTM反转录系统（A5000 、A5001 ）包含进行反转录所需的所有组分。采用A5000/A5001 ，按以下步骤进行， 可快速完成RNA的反转录，得到的cDNA ，适用于绝大部分的实验（包括Real Time PCR、普通PCR、基因克隆等）。 快速操作步骤(一般的RNA模板，快速反应条件仅适合于下游做qPCR) 1. 将GoScript反转录系统中各组分取出置于冰上融化后，按下表加入各组分，配制RT-Mix （按总反应体积20 μl计算； 通常配制RT-Mix要比实际样品数多1-2个，以防止液体挂壁造成的体积损失）： 组分 每反应加入量 乘以样品个数 个 简易流程图 Nuclease-Free Water 0.6μl μl GoScript™ 5X Reaction Buffer 4μl μl 1. 配制RT-Mix MgCl (25mM) 4μl μl 2 Oligo(dT)15Primer (500 μg/ml) 0.5μl μl Random Primers (500 μg/ml) 0.5μl μl PCR Nucleotide Mix 1μl μl Recombinant RNasin® 0.4μl μl Ribonuclease Inhibitor GoScript™ Reverse 1μl μl Transcriptase 总体积 12μl μl 2. 分装至各样品管， 加入RNA模板 2. 将配好的RT-Mix分至各反应管，加入总RNA （1-2 μg）， 并加水将体积补齐至20μl ： 组分 每反应加入量 RT-Mix 12μl RNA(1-2μg) μl 3. 运行反转录程序 Nuclease-Free Water μl 总体积 20μl 3. 设置以下程序进行反转录反应，包括42℃、15min的延 注: 反转录程序完成后得到的cDNA可直接用于Real Time 伸和70℃、15min的反转录酶灭活：