菌株分离-中国试剂网.PDFVIP

中国试剂网 3.10.2.11 工业微生物产生菌的分离筛选（1） 菌株分离（separation ）就是将一个混杂着各种微生物的样品通过分离技术区分 开，并按照实际要求和菌株的特性采取迅速、准确、有效的方法对他们进行分离、 筛选，进而得到所需微生物的过程。菌株分离、筛选（screening ）虽为两个环节， 但却不能绝然分开，因为分离中的一些措施本身就具有筛选作用。工业微生物产 生菌的筛选一般包括两大部分：一是从自然界分离所需要的菌株，二是把分离到 的野生型菌株进一步纯化并进行代谢产物鉴别。 在实验工作中，为使筛选达到事半功倍的效果，总的说来可从以下几个途径进行 收集和筛选： （1）向菌种保藏机构索取有关的菌株，从中筛选所需菌株。 （2 ）由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等，从中进行分离筛选。 （3 ）从一些发酵制品中分离目的菌株，如从酱油中分离蛋白酶产生菌，从酒醪 中分离淀粉酶或糖化酶的产生菌等。该类发酵制品经过长期的自然选择，具有悠 久的历史，从这些传统产品中容易筛选到理想的菌株。 菌株的分离和筛选一般可分为采样、富集、分离、产物鉴别几个步骤。 第一节 含微生物样品的采集 自然界含菌样品极其丰富，土壤、水、空气、枯枝烂叶、植物病株、烂水果等都 含有众多微生物，种类数量十分可观。但总体来讲土壤样品的含菌量最多。 一、从土壤中采样 土壤由于具备了微生物所需的营养、空气和水分，是微生物最集中的地方。从土 壤中几乎可以分离到任何所需的菌株，空气、水中的微生物也都来源于土壤，所 以土壤样品往往是首选的采集目标。一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每 克土壤的含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）放线菌（107）霉菌（106） 酵母菌（105）藻类（104）原生动物（103），其中放线菌和霉菌指其孢子数。 但各种微生物由于生理特性不同，在土壤中的分布也随着地理条件、养分、水分、 土质、季节而有很大的变化。因此，在分离菌株前要根据分离筛选的目的，到相 应的环境和地区去采集样品。 （一）根据土壤特点 1．土壤有机质含量和通气状况 中国试剂网 3.10.2.11 一般耕作土、菜园土和近郊土壤中有机质含量丰富，营养充足，且土壤成团粒结 构，通气饱水性能好，因而，微生物生长旺盛，数量多，尤其适合于细菌、放线 菌生长。山坡上的森林土，植被厚，枯枝落叶多，有机质丰富，且阴暗潮湿，适 合霉菌、酵母菌生长繁殖，微生物数量相应也比较少。 从土层的纵剖面看，1～5cm 的表层土由于阳光照射，蒸发量大，水分少，且有 紫外线的杀菌作用，因而微生物数量比5～25cm 土层少；25cm 以下土层则因土 质紧密，空气量不足，养分与水分缺乏，含菌量也逐步减少。因此，采土样最好 的土层是5～25cm 。一般每克土中含菌数约几十万到几十亿个，并且各种类型的 细菌和放线菌几乎都能分离到。如好气芽孢杆菌、假单胞菌、短杆菌、大肠杆菌、 某些嫌气菌等。但总的说来酵母菌分布土层最浅，约5～10cm，霉菌和好氧芽孢 杆菌也分布在浅土层。 2.土壤酸碱度和植被状况 土壤酸碱度会影响微生物种类的分布。偏碱的土壤（pH7.0～7.5 ）环境，适合于 细菌、放线菌生长。反之在偏酸的土壤（pH7.0 以下）环境下，霉菌、酵母菌生 长旺盛。由于植物根部的分泌物有所不同，因此，植被对微生物分布也有一定的 影响。如番茄地或腐烂番茄堆积处有较多维生素 C 生产菌。葡萄或其他果树在 果实成熟时，其根部附近土壤中酵母菌数量增多。豆科植物的植被下，根瘤菌数 量比其他植被下占优势。 3 ．地理条件 南方土壤比北方土壤中的微生物数量和种类都要多，特别是热带和亚热带地区的 土壤。许多工业微生物菌种，如抗生素产生菌，尤其是霉菌、酵母菌，大多从南 方土壤中筛选出来。原因是南方温度高，温暖季节长，雨水多，相对湿度高，植 物种类多，植被覆盖面大，土壤有机质丰富，造成得天独厚的微生物生长环境。 4 ．季节条件 不同季节微生物数量有明显的变化，冬季温度低，气候干燥，微生物生长缓慢， 数量最少。到了春天随着气温的升高，微生物生长旺盛，数量逐渐增加。但就南 方来说，春季往往雨水多，土壤含水量高，通气不良，即使有微生物所需的温度、 湿度，也不利于其生