过量表达拟南芥CAT提高烟草对气体甲醛的吸收和抗性-生物通.PDFVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２０１５，３５（５）：４１４８ ＤＯＩ：１０．１３５２３／ｊ．ｃｂ 过量表达拟南芥 ＣＡＴ提高烟草 对气体甲醛的吸收和抗性 韩　双　杨志丽　陈丽梅 （昆明理工大学生命科学与技术学院　生物工程技术研究中心　昆明　６５０５００） 摘要　为提高植物对甲醛的吸收和耐受，利用拟南芥 ＣＡＴ的编码区构建植物过表达载体 ｐｋ ２  ＰｒｂｃＳＴＣＡＴ，在野生型（ＷＴ）烟草叶绿体中过量表达 ＣＡＴ产生２个表达量不同的转基因株系 （Ｃ１、Ｃ３）。用１０ｐｐｍ、２０ｐｐｍ和４０ｐｐｍ气体甲醛处理ＷＴ和转基因烟草，分析过量表达ＣＡＴ的转 基因烟草对甲醛的吸收效率和耐受性。结果表明，转基因烟草对气体甲醛的吸收量明显高于 ＷＴ，且随着处理浓度的升高，转基因株系叶片的可溶性总糖、总蛋白质和总叶绿素含量都显著高 于ＷＴ；转基因株系叶片氧化损伤指标Ｈ０、丙二醛（ＭＤＡ）和羰基化蛋白（ＰＣ）的含量都显著低于 ２ ２ ＋ 野生型。转基因烟草（Ｃ１）的ＰＭＨ ＡＴＰａｓｅ和氢泵活性在４０ｐｐｍ处理后为ＷＴ的３倍和２．５倍， Ｃ１的气孔导度为ＷＴ的２．６７倍。这些结果表明，在烟草中过量表达拟南芥ＣＡＴ能降低甲醛进入 烟草细胞引起的氧化损伤，提高烟草对甲醛的脱毒能力，增强烟草对甲醛的吸收和抗性。揭示气 ＋ 体甲醛胁迫时质膜Ｈ ＡＴＰａｓｅ和氢泵活性影响叶片气孔的导度，这可能是转基因烟草甲醛吸收 效率提高的原因之一。 关键词　过氧化氢酶　过量表达　转基因烟草　气体甲醛胁迫　甲醛吸收 中图分类号　Ｑ３３ ? ［３］ ［４］ 　　甲醛（ＨＣＨＯ）是一种广泛存在的化学物质，它主要 　　有研究表明，一些植物，包括绿萝 、垂叶榕 、拟 ［５］ ［６］ ［７］ 用于化工合成 工业制造、医药合成等化学领域及其 南芥 、香蕉叶片 及常春藤 等对甲醛都有一定的 他工业领域，尤其在农药生产领域具有重要作用。甲 吸收能力，提高观赏植物的甲醛吸收效率将是未来利 醛也是一类对人和动物具有毒性的物质，在现代化学 用生物法研究净化室内甲醛的发展方向。气体甲醛主 农药的生产过程中不可避免的产生大量含甲醛的农药 要通过植物叶片的气孔被吸收进入植物体内。在气孔 生产废水，这些农药生产废水中除含有大量的甲醛外， 开放的蓝光反应中，气孔保卫细胞的形状和体积控制 还有醇、苯、酚、三聚甲醛、甲缩醛等物质，处理起来十 了气孔的大小，在光下保卫细胞中的盐浓度升高，导致 分困难，若含甲醛的农药生产废水直接排放不仅不符 水分输入、保卫细胞膨胀及气孔开放。向光素作为一 合环保要求，并且对动植物都具有严重的危害性［１］。 个蓝光诱导的受体可启动一系列蓝光介导的信号转 导，包括活化质膜 ＋ ＋ 另外，随着生活质量的不断提高，装修已成为现代生活 Ｈ ＡＴＰａｓｅ，通过质膜Ｈ ＡＴＰａｓｅ的 的一部分，而装修所用的材料胶合板、细木工板、中密 泵氢作用提高跨质膜内部的负电势梯度，驱动电压调