分子遗传学-2教材课程.pptVIP

2.3.5真核生物染色体的结构与功能 真核生物的染色体和染色质是同类物质在细胞周期中不同阶段的两种运动形态，中期染色体从形态结构上彼此可以区分染色质分为常染色质和异染色质。经碱性染料染色，颗粒呈均匀分散状并浅染的部分称为常染色质，其折叠压缩程度不高，一般为基因转录活性区，是结构基因所处的位置。颗粒呈浓集状态并深染的部分称为异染色质，异染色质又可分为结构异染色质和兼性异染色质。结构异染色质是指在所有细胞中同源染色体的相同位置上形成的一种永久性异染色质，由相对简单、高度重复的DNA序列组成，主要分布在染色体的着丝粒区、端粒、次缢痕及染色体臂的某些节段上。兼性异染色质也称功能性异染色质，不是永久的，其含量和性质随不同细胞类型而变化，一般由常染色质向异染色质的转化而产生。 ;DNA复制原点(replication origin)、端粒(telomere)和着丝粒(centromere)是构成染色体不可缺少的3个要素。 (1)复制原点 是染色体上开始合成新的DNA的那个部分，约100 bp长，又称为自主复制序列(autonomously replicating sequence，ARS)，不同的自主复制序列都含有一个同源性很高的富含AT的共有序列，该区域上的点突变使ARS失去复制起始功能。因为真核生物染色体很长，而且复制得很慢，所以一个染色体上有许多复制起点，协调一致地工作，总的复制效率是不慢的。 ; (2)端粒 是由独特的DNA序列及相关蛋白质组成的线性真核染色体的末端结构，它具有防止末端基因降解、染色体末端间的粘连和稳定染色体末端及其精确复制等功能。尤其值得注意的是近年发现端粒的长度随细胞不断分裂而逐渐缩短，当染色体端粒短到临界长度，即细胞分裂到一定次数后，正常细胞就不再继续分裂而自动死亡。; 长期以来，国际生物界已对细胞寿命由染色体端粒的长短决定已基本达成共识，因此近年对于端粒与寿命、端粒与细胞癌变的机理研究正方兴未艾。由简单序列组成的串联重复的DNA序列，如5′…TTGGGG3′、5′…TnAGGG3′等等。端粒的DNA序列虽然组成简单，但其DNA的复制方式却并不简单 。 (3)着丝粒 是细胞分裂中期两条染色单体相互联结的部位，该处为染色体的缩窄处，故又称为主缢痕。着丝粒染色质既含有组蛋白和其他的蛋白质，也含有DNA，而其DNA的序列是很特殊的，能够促进与纺锤体的相互作用。 ;人工染色体构建：首先是用细菌质粒作载体，插入一个指示性基因(作为标记)，再一步一步都用限制酶来切割质粒的DNA，造成一个个切口，以便将染色体的3种成分，一个一个地插入到适合的位置。先将复制起点和一个着丝粒序列加入，最后，两个融合端粒插入质粒，再将已插入各种功能序列的这种质粒放入酵母细胞中，酶就会在细胞中将融合末端切割成两个有功能的端粒，使环状分子变成线状分子而变为人工染色体。;一般认为活性基因包含在常染色质内，异染色质不转录，是S 期晚复制的。分布在染色体的着丝粒区、端粒、次缢痕及染色体臂的某些节段上的结构异染色质由高度重复的DNA组成，与染色体的配对、有丝分裂、减数分裂、保护染色体的完整性、转座、重组以及细胞在发育分化过程中调控基因的表达等多种功能相关。显然，常染色质与异染色质都是由基本结构单位核小体纤维连续组成的，但它们在间期与分裂期的存在状态代表着遗传物质的不同压缩程度。在细胞周期中，异染色质区在间期与分裂期以不同状态存在，保持染色质——染色体结构循环交替变化状态。 ;（1）异染色质形成中的因子 异染色质形成的分子机制很复杂，在多种因子的作用下有多种途径。促使异染色质形成的因子有：组蛋白、修饰组蛋白的酶（翻译后修饰）、组蛋白结合因子、DNA甲基化、重复DNA序列、序列特异的DNA结合蛋白以及非编码的RNAs等。 实验证明组蛋白N端在染色质高级结构的形成中起重要作用。分析揭示组蛋白氨基酸末端含有多种翻译后修饰的基团，这是由修饰组蛋白的酶加上的。其中最显著的是H3和H4的赖氨酸的高度保守的氨基酸末端的乙酰化与甲基化。;转座子是异染色质序列的主要部分。有很多证据表明，在真核生物基因组的进化过程中形成了一种通过表观遗传沉默来抑制转座子转移活性的机制。其中包括染色质修饰和RNA干涉。对于RNA干涉（RNAi）在基因沉默和在异染色质形成中的作用是近年分子遗传学研究的热点之一。大量证据表明，非编码RNA在染色质修饰中有着重要的作用。;（2）异染色体结构域的形成 异染色质的形成与其所在位置的DNA序列密切相关。一般来说，异染色质形成的主要靶区是象转座子和卫星DNA这样的重复序列。这样通过特异的顺式作用，DNA序列可直接成形成异染色质。在这种机制中，先是DNA结合蛋白识别并结合这些序列，接着招募更多的常规沉默因子如组蛋白修饰酶或