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第4章节 利用酵母生产蛋白质.ppt
第四章 利用酵母生产蛋白质;发展历程
1974年rlarck—walker和Miklos发现在大多数酿酒酵母中存在质粒。
1978年Hmnen将来自一株酿酒酵母的leu 2基因导入另一株酿酒酵母,弥补了后者的Leu2缺陷,标志着酵母表达系统的建立。
1981年Hinnen等用酵母基因表达系统表达了人干扰素。
我国也在1983年首次用酵母菌表达了乙型肝炎病毒表面抗原基因。
1996年在全世界科学家的通力合作下,完成了第一个真核生物——酿酒酵母全基因组的测序。
;广泛用于外源基因表达的酵母宿主菌
目前已广泛用于外源基因表达的研究的酵母菌包括:
酵母属 如酿酒酵母
克鲁维酵母属 如乳酸克鲁维酵母
毕赤酵母属 如巴斯德毕赤酵母
裂殖酵母属 如非洲酒裂殖酵母
汉逊酵母属 如多态汉逊酵母
其中酿酒酵母的遗传学和分子生物学研究最详尽,但巴斯德毕赤酵母表达外源基因最理想;糖基化作用(Glycation);简写;糖蛋白中已发现寡糖基的类型;(D)酵母中的寡糖。(E)酵母突变株mnn9中的寡糖。(F)其它类型的寡糖。;氨基酸残基的酰化作用;原核细胞和真核细胞的蛋白分泌途径;;抑制超糖基化作用的突变宿主菌 许多真核生物的蛋白质在其天门冬酰胺侧链上接有寡糖基团,常常影响蛋白质的生物活性。整个糖单位由糖基核心和外侧糖链两部分组成。;4.1 DNA导入酵母细胞;酵母菌的转化程序;酵母菌的转化程序
碱金属离子介导的酵母菌完整细胞的转化
酿酒酵母的碱金属细胞经碱金属离子(如Li+等)、PEG热休克处理后,也可高效吸收质粒DNA,而且具有以下特性:
吸收吸收线性DNA的能力明显大于环状DNA,二者相差80倍。
共转化现象较为罕见。;酵母菌的转化程序
酵母菌电击转化
酵母菌原生质体和完整细胞均可在电击条件下吸收质粒DNA,但在此过程中应避免使用PEG,它对受电击的细胞具有较大的负作用。其优势在于不依赖于受体细胞的遗传特征及培养条件适用范围广,而且转化率高达105转化子/μgDNA。;4.2 酵母的克隆载体;4.3 酵母中外源基因表达的增效作用; 乙肝病毒是一种蛋白包裹型的双链DNA病毒,具有感染能力的病毒颗粒,直径42nm,基因组仅为3.2kb。病毒的主要结构蛋白是病毒的表面抗原多???(HBsAg)或S多肽,它具有糖基化和非糖基化两种形式,颗粒内的蛋白成分包括核心抗原、病毒DNA聚合酶、微量病毒蛋白。;乙型肝炎病毒的结构与性质;产乙肝表面抗原的重组酿酒酵母;(1)质粒拷贝数;
(2)启动子序列;
(3)转录终止;
(4)起始密码AUG的识别;
(5)糖基化作用、折叠和乙酰基化作用;
(6)发酵条件。;4.4 外源基因表达及产物分泌;信号肽及其剪切系统;分泌型蛋白的糖基化修饰;a-因子在分泌途径中的修饰过程;
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