高活性纤维素分解菌株的筛选及酶活的测定.pptVIP

课程论文题目是：《高活性纤维素分解菌株的筛选及酶》活的测定》 高活性纤维素分解菌株的筛选及酶活的测定 从自然界中提取的产纤维素酶的菌株，经过分离纯化并且培养，然后对其产的酶进行分级沉淀、透析、浓缩，从而提取到菌株的酶，利用DNS法用吸光光度计测量菌株产的酶的活力。最后控制变量法对影响菌株产酶的因素进行研究，从而得出菌株产酶的最优条件。 大家有没有想过我们身边的植物是吃了什么而长大，由细小变得粗大而且还很重的？记得读小学的时候我的《自然》课的老师给我们讲了一个实验：就是将一颗小树栽种在小花盆里，称量了盆里的土壤的质量还有小树苗及盆的总的重量之后，让小树自己生长。当小树张得明显高大了的时候再去称量小树下的土壤的重量，以及树苗及盆的质量。比较结果发现，土壤的质量变化不大，几乎没有发生变化，但是小树苗长大了，质量增加了，这就奇怪了，小树苗的重量从哪里来的？经过科学家的研究发现，植物生长需要二氧化碳。大家都知道碳占细胞干重的一半。生物是不是很神奇？如此大的碳的量对于我们来说那真是无尽的宝藏。那么我们该怎么利用他们呢？ 植物的骨架----纤维素 纤维素是由葡萄糖以β-1,4-糖苷键连接而成的线状大分子物质, 是植物组织的基本成分,也是绿色植物光合作用的主要产物.它的含量约占植物总量的一半。 纤维素酶：是一种用于催化纤维素分解为糖类小分子的一种高效环保的酶。包括C1 酶(内-β—葡聚糖酶)、Cx 酶(外-β—葡聚糖酶)、β—葡萄糖苷酶。 菌株的筛选及测定 由在自然界中存在分解纤维素的微生物，它们能够产出高效的纤维素酶，据此我们采集土样进行筛选。通过配制培养基，在不同的温度、PH等影响因素条件下对菌株进行筛选，找到优秀的菌株进行培养。 培养基 　　　液体培养基( %) : KNO3 0.2,MgSO4 0. 05 , KH2PO4 0.1 , Na2HPO4 0.1 ,NaCl 0.1 ,pH = 7 　　　平皿培养基( %) : CMC - Na 0. 5 , 蛋白胨0. 25 , 酵母膏0. 05 , MgSO40. 05 , KH2PO4 0. 1 , Na2HPO4 0. 1 , 琼脂2 ,刚果红,pH = 7 　　　摇瓶培养基( %) : CMC - Na 0. 5 ,蛋白胨0. 25 , 酵母膏0. 05 , MgSO4 0. 05 , KH2PO4 0. 1 , Na2HPO4 0. 1 , NaCl 0. 1 ,pH = 7 菌种分离和初筛 　　　从自然界中采集朽木、土壤、粪堆土、草底土、发霉秸秆和霉变玉米等样品，称取2 g 不同样品各放一个三角瓶中,每瓶加无菌水20 mL ,稻草3 g ,搅拌均匀,加棉塞,置于28℃恒温箱中培养72 h. 选择稻草软熟较快的菌悬液接一环到液体培养基中(液体培养基中预先浸没一条1 cm ×3 cm 的新华1 号滤纸) . 在28 ℃下培养一周后,挑选在滤纸条上生长的菌落,分别接入CMC - Na 平皿培养基进一步培养(平皿Φ= 9 cm ,培养基20 mL) . 在24 h 、48 h 分别观察平皿菌落周围水解CMC - Na 透明圈直径的大小。 纤维素酶提取和酶活力测定 酶的提取，采用硫酸铵分级沉淀、透析、浓缩; 酶活力测定.，0. 5 %CMC - Na 溶液,0. 1 MHAc - NaAc 缓冲液(pH = 4. 5) ,经提取并适当稀释的酶液,40 ℃糖化30 min ,100 ℃灭活15 min ,用DNS 法在550 nm 处测O. D 值,用0. 1 %葡萄糖作标准液,以每分钟生成1μmol 葡萄糖为1 个酶活力单位(U) 由在实验中，实验的温度没有做太多的考虑，然而有些特殊的菌株，可能会由于没有在其适宜的温度条件下，我们不能够将其提取到，因此本实验中多进行了一项实验：在不同温度条件下对土壤中的菌株进行筛选。方案：在其他条件都为本实验得出的最优条件下进行实验。 　　　 　培养48 h 后的菌落特征及镜检结果 　　　菌株 　　　透明圈直径(cm) 　　　特　征 　　　镜检 　　　HM1 　　　 0. 5 　　　 菌落小,边缘整齐,光滑 　　　G+ 单球菌 　　　HT1 　　　1. 2 　　　菌落小,粘滑,灰白 　　　G+ 杆菌 　　　 　　　HT2 　　　1. 5 　　　菌落小,边缘不规则,粘滑 G+ 芽孢杆菌 　　　HT3 　　　2. 5 　　　菌落中,边缘整齐,隆起,灰白 G+ 芽孢杆菌 　　　 　　　HZ2 　　　1. 1 　　　菌落小,边缘整齐,乳白色 G+ 双球菌 　　　 　　　HZ3 　　　 1. 0 　　　菌落小,粘滑,橙黄色 　　　G+ 单球菌 　　　不同发酵时间酶活力测定U