转基因拟南芥培养知识介绍.pptVIP

GFP转基因拟南芥的培养及荧光观察 GFP报告基因 发现： 绿色荧光蛋白（Green fluorescent protein， GFP） 水母中发现发光蛋白（20世纪60年代） GFP报告基因 性质： 238氨基酸组成的单链多肽 在蓝光或紫外光激发下发出绿色荧光 有什么用呢? 蛋白质在活细胞中的准确定位及动态变化观察（分泌蛋白的分选、亚细胞定位） 目的基因 目的基因tubulin 拟南芥叶片表皮细胞、保卫细胞中微管骨架的分布情况 根部细胞 目的基因与载体简介 pGMAP65-1::GFP植物表达载体的构建 ? 导入农杆菌自我复制 ? 浸染花粉转入拟南芥 导入成功? 转染成功? tubulin 如何判定载体转化成功，植株内是否有目的基因的表达？ ——载体及植株的筛选 卡那霉素抗性培养基筛选 卡那霉素: 抗生素 影响植物细胞叶绿体和线粒体的蛋白合成,引起植株黄化死亡. 卡那霉素能对转基因植物进行筛选实质上是通过卡那霉素抗性基因起作用的。转基因植物由于含有卡那霉素抗性基因而抑制了卡那霉素的作用，所以通过卡那霉素,转化体就很容易从非转化体中筛选出来。 体式荧光显微镜观察GFP转基因植株 生长两个月左右的