分子生物学实验(修改版)知识讲稿.ppt

4) 影响核酸限制性内切酶活性的因素 (1) DNA的纯度； (2) 酶切消化反应的温度； (3) 溶液中离子浓度及种类； (4) 缓冲液的 pH值。 EcoR I 酶切位点：GAATT_C HindIII 酶切位点：A‘AGCT_T 10× buffer: 500mM Tris-HCl(pH7.5) 100mM MgCl2 10mM Dithiothreitol 1000mM NaCl 酶活性的定义： 一个活性单位（U)，是指在50?l反应体系中，37oC的条件下，经过1小时的反应时间，将1?g DNA 完全酶解所需要的酶量。 因为不同的酶所要求的最适反应条件不同，所以一定要使用与酶相匹配的缓冲系统。一般按照销售酶的公司所提供的相应缓冲液。双酶切或多酶切时要考虑相容性缓冲液问题，一般公司会给用户提供这方面的信息。 学习限制性内切酶的特性、酶解的操作方法； 掌握利用琼脂糖凝胶电泳分离鉴定DNA片段的有效方法。 一、实验目的 实验器材：恒温水浴锅、移液器、离心机 实验试剂：ddH2O、10XBuffer、Plasmid、 EcoRI、HindIII 二、实验试剂及器材 ddH2O : 8.4ul 10XBuffer: 2 ul Plasmid: