非水相生物催化培训课件.ppt

二、酰基转移反应 严格控制含水量； 采用过量酰基供体和选用特殊酰基供体抑制逆反应的方法提高反应速率，减少副反应。 三、醇解反应 醇解反应：酸酐、酯等被醇分解，生成酯和其他化合物的反应。 四、氨解反应 不可逆反应； 五、异构反应 α-胺基-ε-己内酰胺是制造光活性的赖氨酸的重要中间体 六、氧化还原反应 （1）单加氧 （2）双加氧 （3）催化醛类或酮类还原成醇类 与水解酶相比，氧化还原酶如脱氢酶和氧化酶在有机溶剂体系中使用较少，因为他们需要辅酶。 （1）单加氧 （2）双加氧 （3）催化醛类或酮类还原成醇类 第六节 有机介质中酶催化反应的条件及其控制 酶在有机介质中的催化反应受各种因素影响，主要由酶、底物、有机溶剂种类、水含量、温度、pH值和离子强度等。 第七节 非水介质酶催化的应用 脂肪酶的非水相生物催化 一、短链脂肪酸酯 短链脂肪酸酯，是一大类十分重要的香味剂，具有多种天然水果的香味。中国，短链脂肪酸酯每年的产量为几千吨，己酸乙酯和丁酸乙酯，在国内酿造业的需求分别是3000 t/a，1000 t/a。食品中常用的乙酸乙酯（白酒、白兰地，还常用于冰激凌、糖果、面包等食品中），3000 t/a。我国在食品、饮料和医药工业中每年使用价值上亿元的芳香酯。 缺点：国际上化学法生产丁酸乙酯产品价格仅为2-5美元/kg，生物催化法价格180美元/kg。 微生物脂肪酶 根霉属是微生物是脂肪酶的重要生产菌，分离得到超过30种脂肪酶，已被制成商品化酶制剂，德列马根霉、华根霉、米根霉、无根根霉、黑根霉、日本根霉、雪白根霉。 不同来源的脂肪酶在选择性上有所不同，来自根霉的脂肪酶大多具有高度的1、3位置专一性。 应用：芳香酯、生物柴油、手性化合物 脂肪酶产生菌筛选： 三丁酸甘油酯或吐温-80为底物的透明圈法；在橄榄油琼脂平板加入罗丹明B的荧光圈法。如Torres等人以三丁酸甘油酯平板为初筛、在异辛烷中催化合成油酸丙酯的能力为复筛。 从酿造浓香型大曲酒的酒曲中筛选到一株华根霉，全细胞脂肪酶在庚烷中催化合成己酸乙酯的转化率较高，并适用于催化其他短链芳香酯的合成。 生产工艺 碳源：葡萄糖常对产酶有抑制作用，常用脂肪酸和脂类物质，除了作为碳源外，还可作为产脂肪酶的诱导剂。少根根霉产脂肪酶受玉米油诱导。 氮源：米根霉脂肪酶，蛋白胨适用于胞外酶的产生，胰蛋白胨有利于胞内酶的产生。 发酵条件：除了pH、温度，氧起到重要的作用，氧传递速率比溶解氧影响更大。在菌体量相同的情况下，改善通风、增强搅拌等提高氧传递速率，提高酶活。 正己烷反应体系，极性中等，转化率最高。 二、江南大学 短链脂肪酸合成研究 王栋 Xu Y, Wang D, Mu X Q, et al. Biosynthesis of ethyl esters of short-chain fatty acids using whole-cell lipase from Rhizopus chinesis CCTCC M201021 in non-aqueous phase [J]. Journal of Molecular Catalysis B-Enzymatic, 2002, 18(1-3):29-37 “华根霉（Rhizopus chinensis）产脂肪酶及有机相中脂肪酶酶法生物转化短链脂肪酸酯技术”2003年获国家教育部技术发明二等奖； 1. 脂肪酶非水相中生物转化失水山梨醇单油酸酯的方法[P].CN3，已授权 2. 一种无溶剂体系中生物转化油脂制备生物柴油的方法[P]. CN 200710191264.X，已公开 2、酶的特异性发生变化 底物选择性： 枯草芽孢杆菌蛋白酶催化N-乙酰-L-苯丙氨酸乙酯或N-乙酰-L-丝氨酸乙酯与丙醇的酯交换，在水和有机溶剂中的选择性与底物在两相中的分配系数有关。 2、酶的特异性发生变化 对映选择性： 酶的立体选择性随有机介质的不同而发生改变。 关于溶剂影响酶选择性的最有说服力的例子是日本名古屋田野公司对硝基地平（1-取代的二氢吡啶单酯或双酯）的研究。 假单胞菌脂肪酶催化二氢嘧啶二羧基酯类衍生物选择性水解产生二羧酸单酯。相同酶在不同有机溶剂体系中反应所得产物的构型相反。 2、酶的特异性发生变化 区域选择性： 指酶对底物分子中几个相同官能团中的一个具有优先反应能力。 2-辛集-1,4-苯二酚二丁酸酯与醇的转酯化反应，1-位上被醇解的速率和4-位上醇解的速率随溶剂疏水性变化而大不相同。 化学键选择性： 酶选择性的催化底物分子中化学性质不同的官能团中某个基团。 如6-氨基-1-己醇的化学酰化反应中氨基的反应性较羟基高而优先被酰化，但用黑曲霉脂肪酶催化的结果却正好相反，即羟基占绝对优势，这使得不用保护基而制备氨