细菌感染的实验诊断.ppt

* 六.培养细菌的目的 确定有无细菌 鉴定细菌 药敏试验 计数细菌 利用细菌:制备菌苗,生产抗生素或基因工程产品 * 第五节 细菌代谢产物的检测 * 一.细菌毒素的检测 内毒素:致热作用:兔体温 鲎试验 外毒素:体内:毒素与抗毒素的中和试验 体外:Elek平板法:沉淀反应 ELISA * 毒素和抗毒素的中和试验 外毒素 ? 外毒素?+已知抗体 小白鼠 小白鼠 结果 发病 发病 有毒性,但不是相 应的 发病 不发病 是相应毒素 不发病 不发病 无毒性 * 抗毒素 待测细菌 沉淀线 Elek 试验 * 二.生化反应 欲检测细菌的生化反应, 一般是在合适的培养基中加入被测物和检测其代谢产物的试剂, 即在鉴别培养基中进行培养, 或直接加试剂于培养物中, 观察呈色等现象判定结果 * (一)碳水化合物的代谢试验 糖(醇)发酵试验:酸,气体 氧化-发酵(O/F)试验: ?-半乳糖苷酶(ONPG)试验 七叶苷水解试验 甲基红试验 V-P试验 * (二) 蛋白质和氨基酸的代谢试验 明胶液化试验 Indol试验 Ura试验 H2S试验 苯丙氨酸脱氨酶试验 氨基酸脱羧酶试验 * (三)碳源氮源利用 枸橼酸盐利用试验 丙二酸盐利用试验 * 枸橼酸盐利用试验 * (四)酶 氧化酶试验 过氧化氢酶试验 硝酸盐还原试验 卵磷脂酶试验 凝固酶试验 CAMP试验 胆汁溶菌试验 * (五)抑菌试验 O/129试验 杆菌肽试验 Optochin试验 * 第六节 感染的血清学检测 已知抗体检测细菌的抗原用于鉴定细菌 已知抗原检测病人血清中的抗体 用于诊断感染性疾病 * 一.血清学鉴定 了解微生物的抗原结构 用已知抗体检测细菌的抗原组合 特异性较高 多在鉴定的最后进行 可用多种血清学方法,细菌多用凝集反应,病毒多用中和试验 * 二.血清学诊断 查抗体: 用已知抗原 IgM: 感染的指标 IgG: 效价有4倍以上增高或 高于当地人群水平 多用于病程较长的全身性感染 * 第七节 感染的分子生物学检测 检出病原体DNA证明病原体存在 * 一.核酸检测的用途 细菌分类 临床诊断,快速鉴定 耐药性检测 毒素检测 流行病学调查 * 二.核酸检测的方法 G+C mol% PCR 限制性内切酶片段长度 核酸杂交 * 限制性内切酶酶切分析 限制性内切酶是能够在一定部位切开DNA的酶 同样的内切酶可将相同的DNA切成同样数目的，同样大小分子量的片段 电泳后对所得图谱进行分析可判断DNA是否相同 * 1989年国外某医院泌尿科3周内从病人血，尿中分出8株不动杆菌，具有相同的耐药性，经 Smal I 酶切后出现相同片段，但与环境中或其他科室分出的不动杆菌不同，表明泌尿科的病人是由同一克隆引起的爆发 * 某医院ICU病房，从水池和病人标本中分出多株铜绿假单胞菌，将其染色体DNA用X Bal 酶切，发现彼此之间没有共同的酶切片段图谱，病人之间图谱的也不相同，说明这不是一次爆发 * 第八节 动物实验 * 一.动物实验的用途 分离细菌, 获取纯种 检测其致病性, 观察发病或死亡,可同时 加抗体进行中和试验或保护试验 制备抗体 诱导变异 建立感染模型 检测生物制品的安全性 * 二.实验动物的选择 多用易感的小动物, 如小白鼠, 豚鼠 按需要选择 纯系,突变系,杂种 无菌动物(GF), 悉生动物(GB), 无特殊病原体动物(SPF), 最低限度疾病动物(MDA), 普通动物 可选用多种途径注射,如腹腔,静脉,皮下,颅内等 * 可供细菌鉴定的方法 形态: 个体, 菌落, 液体基生长情况 生长需要:氧,温度,营养物 生化反应: 观察其酶活性 抗原性: 用已知抗体 致病性: 动物实验 核酸: PCR, 酶切片段长度, 杂交 * 界_门_纲_目_科_属_种 种是具有相同生物学特性的生物聚合群 型：生化型，血清型，噬菌体型 株：不同来源 双命名：金黄色葡萄球菌 staphylococcus aureous