黄牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析.docVIP

黄牛白细胞介素-2基因的克隆与序列分析 山东农业大学(自然科学版),201l,42(2):205—210 JournalofShandongAgriculturalUniversity(NaturalScience) 黄牛白细胞介素一2基因的克隆与序列分析 刘杰,谢昆,蒋成砚,吴晶萍,韩雪,王冉 (红河学院生命科学与技术学院,云南蒙自661100) 摘要:为了克隆黄牛IL一2基因,采用RT—PCR技术,用ConA刺激12h的黄牛颈部外周血淋巴细胞为材料,从 总RNA中扩增出黄牛IL一2基因,琼脂糖凝胶电泳技术显示扩增片段约为500bp,分离纯化,将其克隆到 PDM18一T载体,重组质粒经PCR鉴定,双酶切鉴定以及核苷酸测序.结果显示,克隆的黄牛IL一2基因大小 468bp,与GenBank中报道的水牛,牛,绵羊,猫,马,鸡,犬,人,山羊,鼠,猪IL一2基因比较,同源性分别为98. 9%:98.5%;97.0%;82.4%;79.9%;5.3%;78.2%;79.7%;95.9%;65.2%;84.7%. 关键词:黄牛;IL一2;克隆;序列分析 中图分类号:S823.8+l文献标识码:A文章编号:1000—2324(2011)02—0205—06 CLONINGANDSEQUENCEANALYSISONIL一2GENEINCATTLE LIUJie,XIEKun,JIANGCheng—yan,WUJing—ping,HANXue,WANGRan (CollegeofLifeScienceandTechnology,HongheUniversity,Mengzi66110,China) Abstract:Inordertoclonecattleinterleukine一2gene,accordingtoGenBankinthebovineInterleukine一2(IL 一 2)cDNAsequences,asizeof500bpcDNAfragmentwasamplifiedbyRT—PCRfromthetotalRNAextrac— tedbyConAstimulated12一hourscattleperipheralbloodlymphocytes.andthenconstructedpMD一18T—IL一2 recombinantvector,followingidentificationofPCRanddoubledigestionofEcoR一1andBamHI.Sequencea— nalysisindicatedthatcattleIL一2genecatainedanopenreadingframes(ORF)of468bp.Comparedthenucleo— tidewithbovine,buffalo,sheep,cat,horse,chicken,canin,human,goat,miceandpig,thehomoloaieswere 98.9%,98.5%,97.0%,82.4%,79.9%,5.3%,78.2%,79.7%,95.9%,65.2%and84.7%,respectively. Keywords:Cattle;IL一2;cloning;sequenceanalysis 白细胞介素一2(interlenkin一2,IL一2)主要是由活化的T淋巴细胞产生的一类重要的淋巴因子,具有 广泛的生物学特性.可以促进T,B淋巴细胞的增殖和分化,并可增强NK细胞,单核细胞等的杀伤活性, 在抗肿瘤,抗病毒,免疫调节及感染性疾病的治疗中具有重要作用¨.特别是牛IL一2不仅对牛而且对 多种哺乳动物的淋巴细胞具有很强的诱导增殖作用j,作为免疫佐剂,在牛支气管炎病毒和牛疱疹病 毒疫苗免疫中起到很好的作用,在牛乳腺炎的预防与治疗中也有很好的作用.近年来人们对IL一2 进行了大量的研究,许多动物如牛,绵羊,山羊,猫,狗,马,猪,人,鼠,鸡的 IL一2基因已被成功克隆,但黄牛IL一2基因的克隆还未见报道.本研究应用RT—PCR技术从经ConA 刺激的黄牛颈部外周血淋巴细胞总RNA中克隆黄牛IL一2基因,为IL一2蛋白的表达和生物学活性研究 奠定基础. 1材料和方法 1.1血液及试剂鲁西黄牛外周血采自云南蒙自芷村.淋巴细胞分离液(密度1.086),1640培养液为 收稿日期:2010—05—19 基金项目:红河学院生物化学与分子生物学重点学科建设项目(071010);红河学院大学生科技创新项目(SSTIF08044) 作者简介:刘杰(1961一),男,汉族,副教授,云南昆明人,主要从事动物细胞因子克隆方面的研究. 山东农业大学(自然科学版)第42卷 北京索莱宝科技有限公司,刀豆蛋白A(ConA)购自Sigma公司,pMD