蛋白质3－分子量SDS.pptVIP

Protein蛋白質4－分子量SDS、 CBR染色法 分子量SDS實驗原理： SDS（Sodium dodecyl sulfate－polyacrylamide gel electrophoresis）為變性（denature）的蛋白質電泳，可依分子量分離出不同大小的蛋白質成分，其後以CBR染色或銀染判讀結果。 實驗材料： Acrylamide + bis-acrylamide ( 37.5 : 1 )、APS (ammonium persulfate)、TEMED、Running buffer及Sample buffer。 儀器：SDS電泳槽套組、電源供應器。 實驗方法： a. 樣品前處理－取樣品與sample buffer等量混合，水浴95℃，5mins後快速離心取上層液。 b. 電泳操作－架設電泳裝置套組，將running buffer倒入電泳槽中，取下孔梳，分別將處理好的樣品各12μl注入well內。蓋上電泳槽，連接電極線於電源供應器，調整電壓至80 V開始跑電泳約30 mins，至上下膠體間集膠，後電壓調至120 V，由追蹤染劑觀察蛋白質泳動情形，接近膠體底部時停止電泳。 CBR染色法 實驗原理: 利用(1) coomassie Brilliant R-250分子上的芳香苯環與蛋白質分子上疏水性的區域結合; (2) coomassie Brilliant R-250分子上的亞硫酸基團(-SO32-)與蛋白質分子的正電荷結合，而使蛋白質染出藍色的色帶。 實驗材料： CBR染色液: coomassie Brilliant R-250 0.75 g methanol 250 ml acetic acid 50 ml milli Q water 200 ml CBR脫色液: 20% methanol 10% acetic acid in milli Q water 儀器: 乾淨塑膠盒、玻璃片、玻璃紙 實驗方法： 1. 將電泳後之膠片浸入CBR染劑中20~30 min。 2. 倒出染劑，以自來水清洗後以CBR脫色液退色至蛋白質色帶清楚呈現為止。 3. 封膠、放乾。