微卫星序列也叫简单重复序列，在基因组中含量丰富，易发生改变 b...b.docVIP

蔺草品种间DNA指纹鉴定技术研究初报*　　 摘要: 本实验以四个代表性品种（鄞蔺1号、农林4号、岗山和太草）为材料，采用SSR引物对基因组DNA进行PCR扩增，结果表明67对SSR引物引物RM24在鄞蔺1号和其它三个品种农林4号、岗山和太草之间具有明显差异；而引物RM267和RM330在农林4号和其它三个品种间表现多态性差异。因此，SSR引物RM24可初步作为区分我国蔺草品种与其他国家或地区品种的DNA指纹标记。　　 关键词: 蔺草; 微卫星标记; DNA指纹　　 　 BRIEF REPORT ON DNA FINGERPRINTING TECHNIQUE OF　 Juncus effusus L.　　　 Abstract：Four Juncus effusus L. varieties Yinlin 1, Nonglin 4, Gangshan and Taicao were used to develop DNA fingerprinting technology. All SSR primers were used to perform PCR amplification of genomic DNA in Mat Rush. The results showed sixty seven pairs of SSR primers can amplify PCR products in four cultivars. The result also demonstrated that PCR products amplified by SSR primer RM24 in Juncus effusus L. variety Yinlin 1 were different from those in other three varieties, while SSR primers RM267 and RM330 could differeniate Nonglin 4 from other three cultivars. Since Yinlin 1 was developed by the breeders in China, RM24 could prelimarily act as DNA fingerprinting marker to distinguish the varieties of Mat Rush produced by China from those produced by other countries and regions. 　 Key words: Juncus effusus L., microsatellite marker, DNA fingerprinting 　　　 　　　蔺草(Juncus effusus L. var. decipiens Buchen)，原产亚热带，植物学上属单子叶植物纲百合花目灯心草科灯心草属的多年生宿根性草本植物，俗称席草，其草茎可编织榻榻米、草席、草垫、草扇和草篮等。所织席子以浙江宁波的宁席、江苏仪征县的朴席和吴县的苏席被誉为三大名席，尤其是宁席主要出口日本，已成为宁波市外贸收入的主要农业产品[1]。但2003年7月8日日本正式实施《种苗修改法》后，我国许多企业从日本引进的品种都有可能成为“侵犯”日本新品种专利的靶子。为此，对我国现有的蔺草品种资源进行有效的分子鉴定显得尤为重要。另外，近年来我国蔺草品种混杂非常严重，极大地限制和影响了蔺草的生产，而形态观察法很难区分，由此开展蔺草品种的DNA指纹分析也是极其必要的。　　 本实验以四个代表性品种鄞蔺1号、农林4号、岗山和太草为材料，采用SSR引物对蔺草基因组DNA进行PCR扩增，以期建立蔺草品种间的DNA指纹鉴定技术。现将研究结果初步汇报如下：1材料与方法　 1.1材料 　 选用蔺草品种鄞蔺1号、农林4号、山和太草为4个品种为实验材料，其中鄞蔺1号由我国蔺草育种专家沈伟其教授等选育而成[2]，其它三个品种分别产自日本和台湾等地区。实验所用材料均来自茎尖组培苗。　 1.2 基因组DNA提取　　 CTAB法提取蔺草基因组总DNA称取1g，加液氮研磨成粉末，在液氮末挥发完之前加入10 ml预热的CTAB提取缓冲液6.25 mM 乙基黄原酸钾盐，0.5% 十六烷基三甲基溴化铵cetyltrimethyl ammonium bromide，700 mM NaCl，10 mM EDTA和 100 mM Tris（pH 7.5）]，振荡混匀，60℃温浴1h。然后加入等体积的酚/氯仿混合液，轻摇混匀后静止10min，6000rpm 离心10min，吸取上清液至一新离心管，加入等体积的无水乙醇混匀，-20℃沉淀至少30