《10基因诊断》.ppt

1 血友病 替代治疗 疾病传播，费用昂贵 基因治疗没有突破 携带者及产前检查杜绝患儿出生、根治疾病 血友病A为例说明基因诊断的临床应用 血友病携带者和产前诊断流程 结果（1） 内含子1倒位机制 内含子1倒位检测方法 间接基因诊断 第一代标志 (参照国外） F8基因内的BclⅠRFLP F8基因内两个STR位点 F8基因外的St14 VNTR 第二代标志（自主开发） 6个与F8 紧密连锁的STR位点： DXS15、DXS9901、G6PD、DXS1073和DXS1108 距F8 1.5Mb内 1个F8 内的STR位点(F8Civs13) 性别位点为牙釉蛋白基因（Amelogenin gene） 终产物 X染色体102bp，Y染色体 108bp 遗传连锁分析的多态性位点的相对位置 特殊血友病A家系的基因诊断 先证者自幼皮肤、头颅撞伤后及拔牙及手术后有出血难止，曾发生过颅内出血 BT、PT正常 APTT延长，FVIII:C 2% 输注全血或抗血友病球蛋白治疗有效 先证者已故 直接基因测序 结果： 携带者外周血DNA直接测序未检测出突变 原因： 据文献报道FVIII直接基因测序有1%-10%的患者查不到基因突变 （ Hum Mutat. 2002 Oct;20(4):267-74） 存在大的缺失? 内含子突变？ 携带者诊断结果 间接诊断结果BclI酶切图 BclI酶切图测序图 间接诊断结果ca13 基因扫描 间接诊断结果ca22基因扫描 血友病A携带者间接诊断结果分析 女性血友病A的基因及产前诊断 标本来源 先证者（II-1），女，21岁，汉族，自幼有踝关节及膝关节有自发出血，临床诊断为血友病A，冷沉淀及浓缩FVIII输注有效，因怀孕要求作基因诊断及产前诊断 基因检测结果 F8内含子22倒位 F8内含子1倒位 先证者 阳性（携带者） 阴性 胎儿 阴性 阴性 其他人 阴性 阴性 先证者F8基因所有外显子及其侧翼序列扩增测序 （-） 遗传连锁分析 发病机制 先证者来自母系的X染色体大部分被灭活，而来自父系的X染色体保留活性 家系其他成员及胎儿为X染色体随机灭活 发病机制 先证者一条X染色体发生了F8基因内含子22倒位，而未检测到其它F8基因相关突变 遗传连锁分析发现该女性患者的两条X染色体分别遗传自其父母，排除其为单亲二倍体 先证者的X染色体灭活呈非随机性灭活，其遗传自父亲的X染色体大部分保留了活性 女性血友病 A(2) 3637-3638insA突变是如何产生的? 母亲外周血DNA的 F8 没有检测到基因突变 母亲不同组织DNA F8基因检测也没有检测到突变，不是体细胞的嵌和体 患者3637-3638insA自发突变（ de novo） 框移突变(3637-3638insA) 间接诊断中的基因重组 HA家系情况 先证者II-3为重型血友病A患者，F8C1.0% II-5要求作携带者诊断 HA家系遗传连锁分析的结果 HA家系检测结果 22倒位：均为阴性 1倒位：先证者（II-3）为阳性，女性（II-5）为携带者 HA家系诊断结果 内含子1倒位是该家系HA发生的致病机制，II-5为内含子1倒位携带者 遗传连锁分析发现II-5在ST14，DXS15，DXS9901，G6PD与DXS1073，F8Civs13，CA22，DXS1108间发生染色体的同源重组 结 论 在应用间接诊断进行HA家系携带者及产前诊断时，不能仅使用单一的位点进行诊断，必须联合应用多个与F8相关的位点来进行遗传连锁分析，尤其是F8基因内的多态性位点 2009血友病基因诊断 5 A 154 203 203 124 156 80 86 C 154 203 203 124 156 84 96 B 154 195 195 128 156 80 86 Ⅰ Ⅱ 1 2 3 B 154 195 195 128 156 80 86 C 154 203 203 128 156 80 86 A 154 203 203 124 156 80 86 ？ F8 F8 F8 F8 2Kb 1.5Kb 2Kb 1.5Kb III-1表姐： -/- II-2舅妈： -/- II-3母亲： +/- II-4父亲： +/+ III-2待检者：+/+ M BclI酶切识别位点 T/GATCA 图a 待检者测序图， 含BclI酶切位点 图b