生物物理学-4 圆二色光谱-13技术知识.pptxVIP

圆二色性光谱及其应用 （Circular Dichroism，CD）;UV;UV;;4.1 圆二色光谱的基本原理 4.2 圆二色光谱分析在生物学研究中的应用 4.3 圆二色光谱实验中的注意事项 ;4.1 圆二色光谱的基本原理 4.2 圆二色光谱分析在生物学研究中的应用 4.3 圆二色光谱实验中的注意事项 ;What is a Light? ;1916年, Einstein, 激光;;1、自然光;;双折射现象： 一束光射入各向异性晶体后有两束折射光。;自然光;也称线（完全）偏振光，简称偏振光。 它的振动面称为其偏振面。 振动方向保持不变 振幅发生周期性变化 E之端点在空间的轨迹为一平面正弦曲线 投影到垂直于光传播方向的平面上为一直线段;振幅保持不变，而方向周期变化， 电场矢量绕传播方向螺旋前进;朝光源看， 电场矢量方向按顺时针方向旋转的，称为右圆偏振光； 电场矢量方向按逆时针方向旋转的，称为左圆偏振光。;一束自然光可以看作是两束相互垂直而没有相位关系的平面偏振光的加和。;;;振幅相等、振动方向相互垂直、相位相差1/4波长的两平面偏振光合成圆偏振光;;;旋光性：光学活性分子对左、右圆偏光的折射率不同，透射光虽然仍然为平面偏振光，但其偏振面旋转了一定的角度。 旋光物质又称为光学活性物质。 旋光度：偏振面旋转的角度;圆双折射：某个物质对于左、右圆偏振光的折射率分别为nL和nR， 若 nL = nR，则为光学各向同性物质； 若 nL ≠ nR，则为光学各向异性物质；左、右圆偏振光的相位改变， 若nL＞nR，透射光的偏振面右旋。 若nL＜nR，透射光的偏振面左旋。;光的吸收;椭圆偏振光;圆二色性的存在将通过该物质传播的左、右圆偏振光变成椭圆偏振光，并且只在发生吸收的波长处才能观察到。;圆二色性与椭圆率 ;;同时产生 包括同样的分子结构信息：光学活性物质分子中的不对称生色团。 CD反映光与分子间能量的交换，旋光性则是与分子中电子的运动有关。 可以由Kronig-Krammers转换方程相互转换。;CD谱的极值处与吸收峰一致（科顿效应，cotton effect），因而分子中不同生色团对于谱的贡献比在ORD中更容易分辨。 ORD是渐近线，两端不回归;CD比ORD容易辨别重叠峰;S1-S2:第一级单??器；S2-S3:第二级单色器; M：球面反光镜；P：晶体石英棱镜；L:透镜；F:滤光器；;Peltier Cell Holder;4.1 圆二色光谱的基本原理 4.2 圆二色光谱分析在生物学研究中的应用 4.3 圆二色光谱实验中的注意事项 ;The peptide bond is inherently asymmetric and is always optically active;1、氨基酸的圆二色性;Far-UV (250-170nm) Secondary Structure: α-helix, β-sheet, β-turn, random Tertiary Structure Class: all-α, α+β, α/β, all-βI, all-βII Near-UV (320-250nm)： aromatic side chain Near-UV ~ Near-infrared (300-1000nm)： colored proteins;苯丙氨酸（ phenylalanine， Phe）：255、261和268nm附近； 酪氨酸（ tyrosine， Tyr） ：277nm左右； 色氨酸（ tryptophan， Trp） ： 279、284和291nm附近； 二硫键的变化反映在整个近紫外区。 ;Near UV CD spectrum;Far UV CD spectra of poly-L-Lys;CD application;;3、估算蛋白质二级结构含量;myoglobin;GCN4-p1;Best fitting procedures use many different proteins for standard spectra;Limitations of CD secondary structure analysis;Applications of CD in structural biology;克山病探究-硒缺乏;烟草花叶病毒侵染膜蛋白;Aβ40蛋白构象转变;Unfolding/folding;Conformational varies;;; Near UV spectra: to investigate the