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大鼠可溶性细胞间粘附分子1(sICAM-1)酶联免疫分析 试剂盒使用说明书 本试剂盒仅供研究使用。 检测范围： 96T 20ng/L -500 ng/L 使用目的： 本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1) 含量。 实验原理 本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1)水平。 用纯化的大鼠可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被 单抗的微孔中依次加入可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1)，再与 HRP 标记的可溶性细胞间 粘附分子 1(sICAM-1)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物 TMB 显色。TMB 在 HRP 酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜 色的深浅和样品中的可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1)呈正相关。用酶标仪在 450nm 波长 下测定吸光度 （OD 值），通过标准曲线计算样品中大鼠可溶性细胞间粘附分子 1(sICAM-1) 浓度。 试剂盒组成 1 30 倍浓缩洗涤液 20ml ×1 瓶 7 终止液 6ml ×1 瓶 2 酶标试剂 6ml ×1 瓶 8 标准品 （960 ng/L ） 0.5ml ×1 瓶 3 酶标包被板 12 孔×8 条 9 标准品稀释液 1.5ml ×1 瓶 4 样品稀释液 6ml ×1 瓶 10 说明书 1 份 5 显色剂 A 液 6ml ×1 瓶 11 封板膜 2 张 6 显色剂 B 液 6ml ×1/瓶 12 密封袋 1 个 标本要求 1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。若不能 马上进行试验，可将标本放于-20 ℃保存，但应避免反复冻融 2．不能检测含 NaN3 的样品，因NaN3 抑制辣根过氧化物酶的 （HRP ）活性。 操作步骤 1. 标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀 释。 480 ng/L 5 号标准品 150µl 的原倍标准品加入 150µl 标准品稀释液 240 ng/L 4 号标准品 150µl 的5 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 120 ng/L 3 号标准品 150µl 的4 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 60 ng/L 2 号标准品 150µl 的3 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 30 ng/L 1 号标准品 150µl 的2 号标准品加入 150µl 标准品稀释液 2. 加样：分别设空白孔 （空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、 待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样 50µl，待测样品孔中先加样品稀释液 40µl， 然后再加待测样品 10µl （样品最终稀释度为 5 倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽 量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。 3. 温育：用封板膜封板后置 37℃温育 30 分钟。 4. 配液：将 30 倍浓缩洗涤液用蒸馏水 30 倍稀释后备用 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置 30 秒后弃去，如此 重复 5 次，拍干。 6. 加酶：每孔加入酶标试剂 50µl，空白孔除外。 7. 温育：操作同 3 。 8. 洗涤：操作同 5。 9. 显色：每孔先加入显色剂 A50µl，再加入显色剂 B50µl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色 15 分钟. 10. 终止：每孔加终止液 50µl，终