环境污染生物监测实验讲义.pdfVIP

环境污染生物监测 实验讲义 主编：孟范平 马冬冬 二OO 九年一月 前 言 《环境污染生物监测》是环境科学专业的一门前沿课程。生物监测采用敏感的 指示生物或生物标识物阐明环境污染的过程、范围和程度，从生物学角度来揭示环 境质量状况。同常规的物理、化学监测手段相比，生物监测具有综合性、灵敏性、 连续性、多功能性、简便易行等优点，因而在环境污染监测中发挥着越来越重要的 作用。 本课程设置实验的目的是培养环境科学专业的学生综合运用已有的生物化学、 环境生物学、环境毒理学、环境微生物学等专业理论知识，熟悉国内外常见指示生 物和生物标志物的工作原理和使用方法，丰富学生环境监测专业知识体系，开阔视 野，培养利用当地典型指示生物和生物标识物进行环境污染监测的能力。 讲义编写人员近年来先后承担国家863 计划、山东省优秀中青年科学家奖励基 金项目、青岛市科技攻关项目等多项纵向科研课题，在整理已获得的科研成果基础 上，精选了蚕豆根尖微核效应（一般性实验）、乙酰胆碱酯酶提取与活性测定方法 （综合性实验）、发光细菌法监测海水生物毒性（一般性实验）、海水镉污染对双 壳类金属硫蛋白的诱导（设计性实验）等实验作为本讲义的主要内容，完成这些实 验的教学预计至少需要17 学时。 建议课程开设过程中进行分组实验，要求每位学生亲自动手实践，善于通过实 验现象的观察和实验规律的总结，获得分析问题和解决问题的能力，并独立完成实 验报告。 编者 2009 年1 月 1 目 录 实验一 海洋鱼类乙酰胆碱酯酶的提取及活性测定⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅3 实验二 含镉废水对蚕豆根尖的微核效应⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅9 实验三 海水的生物毒性监测—发光细菌法⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅15 实验四 海水镉污染对双壳类金属硫蛋白的诱导⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅⋅19 2 实验一 海洋鱼类乙酰胆碱酯酶的提取及活性测定 （类型：综合性实验） 一、实验目的 动物脑组织中所含的乙酰胆碱酯酶[acetylcholinesterase, AChE(EC 3.1.1.7)]对有 机磷农药十分敏感，在一定条件下，AChE 的活性变化与体系中有机磷农药的浓度存 在良好的相关性。通过本实验可掌握鱼类等动物脑组织AChE 的提取和活性测定方 法，为利用AChE 对海水中的有机磷农药进行生物监测积累经验。 二、实验原理 鱼类等动物的脑组织在磷酸盐缓冲液中低温匀浆后，离心得到的上清液即为 AChE 的提取液。作为底物的碘化硫代乙酰胆碱（ATChI ）被AChE 分解为乙酸和碘 化硫代胆碱，后者与5,5 —双二硫代(2 —硝基苯甲酸)反应，生成一种黄色络合物， 于波长412nm 处比色。以酶促反应的初速度来确定酶的活性。 三、实验材料与仪器 （一）实验材料 1 、冰冻的鲅鱼(Scomberomorus niphonius Curier) 或鲜活的黄鱼(Hexagrammos otakii) 2 条。 2 、0.1mol·L-1 （pH 8.0 ）磷酸盐缓冲液（含1% Triton X-100） -1 -1 -1 先配制 1mol·L 的NaH PO 和 1mol·L 的Na HPO 溶液，分别移取 1mol·L 2 4 2 4