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《微生物工程》课程综述 微生物菌种的保藏方法 学生姓名 学 号 学生专业 班 级 二级学院 成绩评定 评阅教师 年 月 微生物菌种的保藏方法 [摘 要]介绍了常用微生物菌种的保藏方法，包括传代培养保藏法、载体保藏法、冷冻保藏法、真空冷冻干燥保藏法、蒸馏水保藏法等。并介绍了其优缺点，为微生物菌种的保藏提供参考。 [关键词]微生物；菌种；保藏方法 The collection of microbial strains [Abstract]This article mainly introduces some commonly used methods of collecting microbial strains, including Culture collection, Carrier collection, Freezing collection, Vacuum freezing collection, Distilled water collection etc. This paper also explains these collections’ advantages and disadvantages to provide the references for collecting of microbial strains. [Key words] microbes ; strains ; collections 1引言 菌种是国家的重要资源，是从事微生物学以及生命科学研究的基本材料，特别是利用微生物进行有关生产更离不开菌种。所以，菌种保藏是进行微生物学研究和微生物育种工作的重要组成部分，其任务是采用最合适的保存方法，使菌种的变异和死亡减少到最低限度。[1]故本文就微生物菌种的常用保藏方法进行了介绍。 2微生物菌种的保藏的基本原理 菌种的保藏方法有很多，其原理主要是根据微生物的生理、生化特点，人为创造低温、干燥或缺氧条件，抑制微生物的代谢作用，使其生命活动降至最低程度或处于休眠状态，使菌株很少发生突变，以达到保持纯种的目的。[2,3] 3微生物菌种的保藏方法 3.1传代培养保藏方法 即定期移植法。包括斜面保藏法、穿刺保藏法等。 3.1.1斜面保藏法 斜面保藏法是一种短期的保藏方法，广泛适用于细菌、放线菌、酵母、丝状真菌等的短期保藏。将微生物在适宜的斜面培养基和温度条件下培养并生长良好后，放入4~5℃冰箱中保藏，一般保存期为3~6个月，到期后须重新传种再行保藏。对不同的菌种，其保藏的温度和时间并非绝对相同。 这种保藏方法的弊端在于短期内多次传代容易引起菌种发生变异，杂菌污染的机会也随之增多。采用这种方法保藏菌种时，可以在可能的范围内减少碳水化合物的含量，或者将试管口更好地密封，减少培养基失水和杂菌污染，以延长保藏期。[4] 3.1.2穿刺保藏法 穿刺保藏法是斜面保藏法的一种改进，常用于各种好气性细菌的保藏。其方法是配置1%的软琼脂培养基，装入小试管或螺口小管内，高度1~2cm，121℃灭菌后，不制成斜面而使其凝固，用接种针将菌种穿刺接入培养基的1/2处。经培养后，微生物在穿刺处和培养及表面皆可生长，然后覆盖约2~3mm的无菌液体石蜡，放入冰箱保藏，可保藏6~12个月。这种方法的适用范围较广，也可用于放线菌和真菌的保藏。 穿刺保藏法简便实用，但对不同的微生物种类保藏期有很大的差异。如有的真菌可保藏10年之久。对一些形成孢子能力很差的丝状真菌，液体石蜡保藏更有效。[4] 3.2载体保藏法 即干燥保藏法。包括滤纸保藏法、沙土保藏法等。 3.2.1滤纸保藏法 将滤纸剪成小条，装入安瓿管中，塞以棉塞，121℃灭菌30min。将需要保存的菌种，在适宜的斜面培养基上培养，使其充分生长。灭菌脱脂牛乳1~2mL滴加在灭菌培养皿或试管内，取数环菌苔在牛乳内混匀，制成浓悬液。用灭菌镊子自安瓿管取滤纸条浸入菌悬液内，使其吸饱，再放回至安瓿管中，塞上棉塞。将安瓿管放入内有五氧化二磷作吸水剂的干燥器中，用真空泵抽干。将棉花塞入管内，用火焰熔封，低温保存。 细菌、酵母菌、丝状真菌均可用此法保藏，前两者可保藏两年左右，有些丝状真菌甚至可保藏14~17年之久。此法较液氮、冷冻干燥法简便，不需要特殊设备。[5] 3.2.2沙土保藏法 取河沙过40目筛去粗粒后，用10%盐酸浸泡2~4h以除去有机质，倒去酸水后用自来水冲洗至中性，烘干备用。另取非耕作层的不含腐殖质的瘦黄土或红土，用自来水浸泡使其呈中