蛋白磷酸化芯片技术及其生命医学研究中的应用.pdf

疾病标志物筛选、信号通路研究 蛋白磷酸化抗体芯片技术与应用 提 纲 如何从临床样本到高高质量的研究论文如何从临床样本到高高质量的研究论文 抗体芯片技术与蛋白组研究 信号传导通路蛋白磷酸化抗体芯片 抗体芯片技术应用 肿瘤转移机制的信号通路研究 RSK2基因与头颈部肿瘤的侵犯和转移 Journal of Clinical Investigation 2010; IF:15.387 发生转移的组织、侵袭力强的细胞 RSK2 高表达 临床的发现： HNSCC细胞系 HNSCC组化检测 抑制RSK2 的活性会减弱细胞的侵袭能力 但不影响细胞的增殖水平 侵袭能力弱的细胞进行RSK2过表达，增强了细胞的侵袭能力； 侵袭能力强的细胞使用RSK2抑制剂进行干预，减弱了细胞的侵袭能力。 RNAi 与stable knock down确定RSK2 而不是RSK1 RNAi stable knock down 体内实验－RSK2稳定敲除细胞系接种裸鼠 RSK2敲除后转移减弱 基因敲除后肿瘤形成未受影响，但转移减弱 细胞增殖未受影响 已知与转移相关的基因发挥作用？ • 已知和RSK2以及肿瘤转移相关蛋白的检测； • 然而，RSK2敲除后，ERK, AKT, STAT3 的 表达和磷酸化水平未发生变化； • 那么究竟机制如何呢？ MAPK pathway phospho-antibody array ? phosphorylation levels decreased c-Jun, CREB, Elk-1, FAK, Hsp27, IRS-1, JunB, c-MET, and Stathmin important for cell migration, invasion, and tumor metastasis Receptor Tyrosine kinase：c-MET and FAK Western Blot 验证 • RSK2: Ser/Thr kinase； • C-MET and FAK phosphorolytion site ：Tyr ； • A decrease in FAK and c-MET activation upon RSK2 downregulation demonstrates the reprogramming of the HNSCC prometastatic signaling network upon RSK2 knockdown. RSK2通过调节CREB 的S133磷酸化影响细胞侵袭  文献报道，RSK2可以通过调节CREB Ser133磷酸