短链烷炔的微生物合成.pdf

短链烷炔的微生物合成 赵传纪 学号：2013304010053 2013年11月18 日 主要内容 一、背景介绍 二、短链烷炔类的生产过程优化 （一）短链FFAs 的生成过程优化 （二）SCAs的生成过程优化 （三）外界条件的优化 三、总结与讨论 一、背景简介 以生物为基础的燃料的可持续生产对我们的可持续发展的未来越来越重要。 例如和现在以石油为基础的燃料或者更好的生物燃料相比，烯炔和烷炔等碳氢 化合物在很多方面更有潜力用来作为生物燃料，包括它的高能含量（例如它比 乙醇高30%的能量）。 曾经有报道说C13-C17长链的碳水化合物生物合成取代柴油。 （1）利用一个含有蓝藻烷炔类生物合成操纵子编码一个脂酰ACP还原酶和乙醛 脱羧酶的大肠杆菌工程菌可使十五烷和十七烷为主的长链碳氢化合物产量达到300 mg/L 。 （2 ）在大肠杆菌工程菌中利用枯草芽孢杆菌的fabH 基因的过表达可以生产偶数 和奇数C原子数目的长链烷炔类。 在这些研究中，炔类的生产都是通过脂肪酰基ACPs直接产生脂肪醛的脱羰作用 产生的。 另外，最近的一些报道称脂肪酸通过脂肪酸还原酶和乙醛脱羧酶的作用可生成 长链烷炔类。 汽油，是一种C4-12的短链碳氢化合物（SCHCs）的混合物，是一 种最早用在内部燃料发动机液体燃料。尽管短链醇类可作为汽油的替 代品生产，但是他们是比不上汽油的次品。因此，生产SCHCs 比直接 利用汽油有巨大的利益。但是，目前为止还没有任何利用微生物发酵 生产SCHCs的报道。这可能由于大部分细菌性脂肪酸是C14-18的长链 类。 因此，这篇文章报道一个大肠杆菌工程菌的开发，能利用脂肪酸 的生物合成与降解过程来生产和汽油类似的短链烷炔类（SCAs）。 图1 通过引入一个新的途径涉及一个突变的脂肪酰基ACP硫酯酶，脂肪 酰基CoA合成酶和还原酶，脂肪醛脱羧酶到大肠杆菌工程菌中来生产短 链脂肪酰基ACPs ，这个策略还可以生成短链自由脂肪酸（FFAs ），脂 肪酯类和脂肪醇类。 二、短链烷炔类的生产过程优化 （一）短链FFAs 的生成过程优化 （二）SCAs的生成过程优化 （三）外界条件的优化 （一）短链FFAs 的生成过程优化 在脂肪酸为基础的生物燃料生产中，FFAs是利用脂肪酰基ACPs通过 硫酯酶的作用得到的，是一个重要的中间代谢产物。 （1）为了检测不同硫酯酶的性能，大肠杆菌W3110 中fadD 基因的缺 失是防止FFAs到脂肪酰基CoAs 的转化。在这三个大肠杆菌tesB基因，tesA 基因和UcfatB基因编码的硫酯酶中，发现Tes A是最好的，能生成产量达到 313 mg/l的FFAs混合物（主要是C16，还有一些少量的C8 C10 C12 C14 ）。 图2 （2 ）由于TesA优先的水解长链脂肪酰基ACPs ，因此需要一个水解短链脂 肪酰基ACPs到FFAs 的硫酯酶。 带一个L109P突变的TesA对长链和短链的脂肪酰基ACPs都有水解活 性。在大肠杆菌中fadD 缺失W3110并表达TesA （L109P ）重组体能产生一 个短链的FFA混合物。使得C16 FFAs减少了91%，C14，C12和C10分别增 加了6.8、12.8和2.2倍。重组菌株W3110 （fadD 基因缺失并包含一个TesA （L109P ））生成C12和C14 FFAs百分比分别是19.5%和69.9% 。（图2b ） 很多有底物特异性和活性的硫酯酶能同样的使用。还有一些其他的途径来 生产短链FFAs 。