免疫细胞的分离与纯化.pdf

Immunodiagnosis 陈建忠 浙江大学免疫学研究所 chenjianzhong@zju.edu.cn 实验三免疫标记技术和免疫细胞分离 • （一）免疫标记技术 1、酶联免疫吸附试验（双抗体夹心法） 2、斑点免疫层析试验 • （二）免疫细胞的分离与纯化 1.密度梯度离心法分离外周血单个核细胞（含 淋巴细胞） • （三）免疫细胞功能测定 1、E玫瑰花环试验（示教） 2、淋巴细胞转化试验（示教） （四）结核病相关的免疫试验简介 酶联免疫吸附试验 （ELISA） “ELISA双抗体夹心法”，第5步，在1-8孔中加标准品 并进行倍比稀释，阳性对照、阴性对照各2孔，每孔 100ul，37℃，30分钟： 标准品倍比稀释 （1-8 ） 待检标本 阴性对照 1-8孔加稀释液100微升，第1孔加TNF100微升， 混匀后吸取100微升到第2孔，依次稀释至第8孔 • （一）免疫标记技术 【概念或原理】 ：利用荧光素、酶、胶体金 、发光物质以及放射性核素等易显示物（标 记物）连接于已知抗体或抗原，再去检测待 测标本中的相应抗原或抗体的量或其存在与 否。 【分类】 荧光免疫技术 酶免疫技术→ELISA （双抗体夹心法 ） 放射免疫技术 金免疫技术→斑点免疫层析试验 化学发光免疫技术等 免疫标记技术举例： （？） Ag ＋ Ab Ag －Ab －荧光素 荧光素 （细胞表面可见荧光） ＋ Ab ＋ Ab －荧光素 荧光素 （洗涤） cells with fluorescence 6 酶免疫技术 酶免疫组化技术：组织或细胞中抗原定位 酶免疫测定(如ELISA) ：测液体标本中抗原或抗体 ELISA (酶联免疫吸附试验，enzyme-linked immunosorbent assay) sandwich ELISA to detect Ag √ indirect ELISA to detect Ab competitive ELISA to detect Ab or Ag 6. ELISA to detect Ab (HIV, HCV) to detect Ag to detect Ag Sandwich ELISA (to detect Ag, 双抗体夹心法，原理) 1）已知抗体包被 polystyrene 2 ）洗板 3 ）加待检抗原标本 ( Ag ) ( no Ag ) 4 ）洗板 5 ）加酶标记抗体 6 ）洗板 7 ）加底物显色，测定 (measure color) （