大型水蚤测试标准规范方法.docVIP

大型水蚤测试标准方法 本标准部分参照国际标准ISO6341：1982《水质——大型水蚤(甲壳纲、枝角目)活动抑制的测定》(UDC 617.777：576.097.2)及美国标准法“水和废水标准检验法”804B.水蚤(Daphnia)的生物检测步骤。 1 主题内容与适用范围本标准规定了大型水蚤生物测试技术中生存及运动影响(急性试验)和生长及繁殖试验方法(慢性效应)。本标准适用于评价可溶性化学物质的毒性；评价工业废水及工业固体废物浸出液的综合毒性；评价废水处理效果；也适用于地面水、地下水的毒性评价及水中沉积物的毒性评价。2 方法原理2.1 测定初始浓度EC50值，此浓度是指在本标准规定的条件下，24h及48h内使50%暴露在 试验液中的大型水蚤失去活动能力的浓度，并指出使所有实验水蚤失去活动能力的最低浓度，及不能使任何实验水蚤丧失活动能力的最高浓度。2.2 测定初始浓度LC50值，此浓度是在本标准规定的条件下24h及48h内使50%暴露在试验液中的大型水蚤心脏停止跳动能力的浓度，并指出使所有大型水蚤死亡的最低浓度及不引起死亡的最高浓度。2.3 测定生长曲线，不同浓度下实验水蚤生长的速度不同，其生长曲线也不同，与对照组生长曲线比较判断其生长影响。2.4 测定生殖量，相同条件的实验水蚤在不同浓度实验液中由于毒性作用，其每胎生出的幼水蚤数量不同，与对照组比较判断其毒性。3 试剂和材料3.1 试验生物采用大型水蚤(Daphnia magna straus)62Dm纯品系生物株，为同龄同母体后代。EC50及LC50试验用1龄～3龄水蚤，每容器10个，平行2～3组；繁殖及生长试验用刚出生的幼水蚤，每浓度组5～6个水蚤。3.2稀释水可采用未被有毒物质污染的天然水(地面水或地下水)及自来水(自然暴气的)，pH值为7～8.6，溶解氧4mg/L以上，或空气饱和氧的60%以上，水的硬度为250±22mg/L(以CaCO3表示)，也可用符合上述条件的人工配制水。3.3 仪器3.3.1 一般实验室玻璃仪器。3.3.2 溶解氧测定仪。3.3.3 体视显微镜。3.3.4 pH计。3.3.5 试验容器：玻璃制结晶皿或烧杯。3.4 试样及实验的制备3.4.1 试样要求有代表性，采样瓶应充满水，采到的废水样品要求在6h内进行毒性测定，否则必须冷藏。3.4.2 试验溶液的制备3.4.2.1 储备液的制备在无离子水中将已知量的被测物质溶解，先配制高浓度的实验原液，按10的倍数连续稀释成各不同浓度，用mg/L表示，对不溶性物质配高浓度原液时可加少量有机溶剂助溶(如丙酮)，但各实验液有机溶剂的最终浓度不得超过0.5mg/L，同时须加溶剂对照。3.4.2.2 工业废水原水样为实验原液，作为100%，用稀释水按百分数(百分率)配制成各浓度。3.4.2.3 工业固体废物。首先磨碎，按固液1∶10比例加入无离子水，摇匀后浸泡24h，滤纸过滤，其溶解部分为被测工业固体废物的浸出原液(100%)，再用稀释水按百分数配制成各浓度。4 试验步骤4.1 大型水蚤EC50及LC50实验4.1.1 预试验确定正式试验的浓度范围，要求得知试验藻全部存活(或无影响)的浓度以及全部死亡(或不动)的浓度，确定被测样品是否稳定，实验水蚤是否健康。4.1.2 正式试验由各浓度中实验水蚤的死亡数得出LC50结果。由各浓度中实验水蚤的不活动数得出EC50结果。实验开始及结束时测定实验液的pH值、水温和溶解氧(DO)。对不稳定性实验液采用定时更换的措施，实验期间实验水蚤不喂食。4.2 大型水蚤的繁殖及生长实验(慢性效应)4.2.1 预试验做48hLC50试验，由48hLC50×0.1得到不引起水蚤死亡的浓度，在水蚤的生存安全浓度范围内选择2～3个生长繁殖试验浓度。4.2.2 正式试验按预试验选好的浓度配制各浓度实验液，平行4～6组，每组设一对照，实验在正常实验室光照下进行，防止直射阳光。实验开始及结束时测定pH及DO，用最高、最低温度计记录实验全程的气温。实验期间，每24h在固定时间用吸管取出实验幼水蚤，分别移入相对应的栅藻藻液缸中喂1h后，移回中毒缸，即时更换中毒液。4.3 实验水蚤的敏感度测定用分析纯重铬酸钾测定大型水蚤24hEC50在2mg/L以下，表明本实验水蚤的敏感度合格。4.4 数据处理与实验结果4.4.1 EC50及LC50试验用半对数纸或概率纸获得EC50及LC50值，也可用计算机LC50程序处理数据。实验结果用mg/L或百分数表示，实验中对照组应无异常。4.4.2 繁殖及生长试验以观察时间为横坐标，平均体长为纵坐标，画出各浓度生长曲线，与对照组生长曲线做比较，判断出作用浓度及不作用浓度。统计各实验液中幼水蚤