NDDS_China_2012_生物制药注射剂的开发与确证-方伟杰.pptxVIP

生物制药注射剂的开发与确证新型给药系统中国峰会2012 2012.10.24方伟杰，博士海正药业生物分析与制剂研究室主任Email: wjfang@主要内容生物制药的特性生物制剂的开发的关键因素物理、化学、生物学性质物理、化学降解的作用机理及抑制制剂分析方法的开发制剂破坏条件的选择辅料的选择和优化海正药业生物制剂的开发实例：HS016总结生物制药的特性由重组技术制备的生物制品如蛋白质、单抗、疫苗等结构，组分复杂蛋白质大分子（5 -160 KDa）1’,2’,3’ 和4’结构复杂混合物，如翻译后修饰等特异性：每个生物药物有不同的性质，如分子量、溶解度、pI、亲水性、高级结构、生物学性质等化学和物理降解化学降解：涉及共价键的断裂和生成，比如脱酰胺化（deamidation），水解 （hydrolysis），氧化（oxidation）物理降解：不涉及共价键的断裂和生成，主要是高级结构的变化，包括吸附，变性 （去折叠），聚集和沉淀生物制药的特性（二）免疫原性Immunogenicity所有生物制药都有潜在的免疫原性！免疫反应的频率很多因素有关：氨基酸序列、质量（如多聚体、糖基化）、病人状况、给药频率、途径产生的后果差异很大：安全性（如过敏反应），疗效（如产生中和抗体neutralization antibody），代谢等影响生物制药稳定性的因素 生物分子的结构（氨基酸序列、翻译后修饰，分子内与分子间作用力）制剂，如蛋白浓度，pH，辅料等生产设施、工艺/过程原材料，如辅料、包材的质量等如何确定生物制剂？了解生物药物的目标产品性质 （Target Product Profile， TPP）了解物理、化学、生物学性质及降解机理开发有效的分析及稳定性检测方法鉴别出主要的降解条件运用筛选（screening）和实验设计（DOE）的原理来评估制剂因素及它们之间的相互作用鉴别出候选制剂进行全方位的研究并最终确定目标产品性质（TPP）给药途径（静脉， 皮下，肌肉）剂型（水针、冻干）单次或者多次使用 (single-/multiple-dose)生物药物的浓度治疗指数、安全性大小给药的频率，是否需要在医院使用市场竞争的情况，新制剂的优点生物药物的物理、化学性质物理、化学性质可以通过软件进行初步估算Mw、溶解度、 pI、EC280、hydrophobicity、高级结构等以往的经验（如文献、其他类似分子等）物理、化学性质需要通过分析进行确认确认上述基本信息热稳定性（Tm，Tagg等）多聚体翻译后修饰（PTM）如糖基化，脱酰胺化等化学降解-脱酰胺化Deamidation天冬酰胺琥珀酰亚胺天冬氨酸异天冬氨酸化学降解-水解 Hydrolysis酸性裂解 Acidic cleavage (Asp-Pro)抗体Hinge部位裂解抑制脱酰胺化和水解反应的方法冻干优化pH，缓冲液种类和浓度增加物理/构象稳定性化学降解-氧化 Oxidation主要在Met、Cys和芳香基氨基酸上，比如Tyr，Trp三大类型金属离子催化氧化反应自由基氧化反应光催化氧化反应抑制氧化反应方法螯合剂（如EDTA）自由基清除剂/抗氧化剂 (如Met and Trp)避光保存排除氧气增加物理稳定性化学降解-其他类型N-端环化如pGlu和DKP反应消旋化和β 消除反应（racimization，β-elimination）还原性糖基化（glycation）二硫键错配（disulfide scrambling）化学性质分析方法化学性质/降解途径分析方法分子量凝胶电泳（SDS），质谱（MS）氨基酸序列Edman降解,LC-MS纯度凝胶电泳（SDS），反相色谱（RPC），分子排阻色谱（SEC），离子交换色谱（IEC），毛细管电泳（CE）电性分布及变化等点聚焦（IEF），IEC,CE脱酰胺化反应IEC，RPC （多肽），LC-MS水裂解反应RPC，SDS，LC-MS氧化反应RPC，肽图，LC-MS共价键结合多聚体SDS，MS物理降解：吸附在表面造成蛋白剂量的损失和构型的改变液-固表面：吸附到包材的容器壁、胶塞液相柱子、过滤器冰-水表面外来异物，包材的渗出物等液-气表面容器的空气（headspace），震荡、搅拌时与空气的接触物理降解：变性/去折叠 二级等高级结构的变化维持天然结构的重要性天然构象是保持生物学活性的基础变性蛋白更容易造成毒副作用如免疫原性变性以后容易发生聚集等后续反应生物药物构象不稳定性的根源变性所需要的能量很低(30kcal/mol)物理降解：聚集Aggregation蛋白质分子通过相互作用聚集在一起蛋白变性（构象改变）相互吸附（胶体不稳定性）分类可逆/不可逆聚集（reversible/irreversible）类似天然构象的聚集/完全变性的聚集（native-like？）共价结合/非共价