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活载体疫苗 概念：利用低致病力的痘病毒、疱疹病毒、腺病毒或细菌作为载 体，将其它病原的主要保护性抗原基因插入到载体基因组的非必 需区形成新的重组体，在同源或兼容性好的启动子驱动下随载体 的复制表达插入的外源基因。 特点：此疫苗具有常规疫苗的所有优点，而且便于构建多价疫苗，建立鉴别诊断方法。 但成功的关键取决于外源基因的表达水平，此类疫苗不能进 行二次免疫。 实例：痘苗病毒+狂犬病毒G蛋白基因，鸡痘病毒+多种其它禽病 原基因，伪狂犬病毒+其它猪病原基因，…… 病毒复制非必需片段基因鉴定 病毒复制非必需片段基因克隆 外源基因插入非必需片段基因中间(即重组载体) 将病毒基因和重组载体基因共转染至细胞，同源重组，产生感染性病毒粒子 筛选稳定的重组病毒 重组病毒活载体研制原理 复制非必需基因 外源基因 病毒 转染 连接 分别扩增左臂片段（L）和右臂片段（R） 分别克隆L、R片段于pBluescript M13- 转移载体pSKLR 转移载体pSKLRG 目的基因完整表达盒 2对引物 猪伪狂犬病病毒弱毒株构建活载体疫苗的构建思路 BHK21 Cells PRV 143TK- Cells 鉴定 鉴定 纯化PRV 提取PRV基因组 技术路线 经sph1、kpn1酶切 含gG、gD、gE基因 PUC18载体 质粒PUSK 质粒PAcGFP-C1 重组质粒PUSG 质粒PIRES-ORF2 构建重组质粒PUSGO 构建重组质粒PUSGI 质粒PIRES-IL-2 * 生物制品制造新技术 第一节 基因工程疫苗 基因工程疫苗主要是指用重组DNA技术研制的疫苗，包括将保护性抗原基因在原核或真核载体细胞中的重组亚单位疫苗，以及以某些病毒或细菌为外源基因载体的活载体疫苗和通过基因组突变、缺失或插入的基因缺失疫苗，以及重组DNA疫苗等。 疫 苗 分 类 活疫苗 经典策略--病毒 重组病毒 重组病毒载体 经典策略--细菌 重组细菌 重组细菌载体 死疫苗 完整病原体疫苗 蛋白基础疫苗 肽基础疫苗 多糖基础疫苗 抗独特型疫苗 DNA疫苗 “Naked” DNA Viral delivery Bacterial delivery 根据疫苗抗原的性质和制备工艺 经典策略活疫苗 在细胞上培养减毒 分离异源变异病毒株 Resorted Genomes 筛选温度敏感突变株 死 疫 苗 1. 完整病原体疫苗 （细菌、病毒） 2. 蛋白基础疫苗(Protein-based Vaccine) 天然蛋白 化学灭活蛋白 基因灭活(重组突变) 重组多肽 (HBsAg, VLPs of papillomavirus) Carrier (酵母Ty颗粒) 3. 多糖基础疫苗 4. 抗独特型抗体 活疫苗 可在宿主细胞中复制 毒力降低 免疫反应比较全面 免疫剂量小 免疫保护期长 死疫苗 不能在宿主细胞 中复制 无毒，不返强 免疫反应不太全面 不会传染给其它 个体 制备技术相对容易 DNA疫苗 可刺接抗原在细 胞内合成 可诱导细胞免疫 制备技术容易标 准化 不同疫苗特性比较 重组疫苗（基因缺失疫苗） 重组载活体疫苗 重组亚单位疫苗 转基因植物疫苗 基因疫苗 基因工程疫苗种类 “标记”疫苗 基因添加疫苗 疫苗： ●重组亚单位疫苗：将病毒或细菌的主要保护性抗原基因在 体外大量表达 ●活载体疫苗：病毒或细菌载体+外源基因 ●基因缺失苗：删除毒力相关，但对病原复制非必需的基因 ●DNA疫苗（肿瘤疫苗） ：质粒+真核启动子+外源基因 ●合成肽疫苗：人工合成保护性抗原蛋白的部分肽段 ●转基因植物可食疫苗：利用植物表达病原的保护性抗原蛋白 抗原： 重组抗原、核酸探针、基因芯片技术、PCR技术, 抗体： 基因工程抗体制造技术，如生物导弹（可以治疗肿瘤）、将抗体基因与毒素基因连接后进行表达。 遗传信息的传递和表达 中心法则 2.质粒 质粒是细菌质粒(Plasmid)是指细菌细胞质中独立于染色体外的、能够自主复制的遗传单位，是环状双链DA