第九章 动物细胞工程概述.pptVIP

（1）贴壁依赖型 简称贴壁细胞，包括成纤维细胞型和上皮细胞型 成纤维细胞型，这种细胞与体内成纤维细胞形态相似，胞内呈梭型或不规则三角形，中央有圆形核胞质向外2～3个长短不同的突起。除真正的成纤维细胞外，心肌、平滑肌细胞培养时均属这一类型。 上皮细胞型 细胞培养时呈不规则的三角形，中央有圆形核，生长时常彼此紧密相连成单层细胞片，如皮肤的表皮细胞、肝细胞、胰脏细胞和肺泡上皮细胞的培养细胞 （2）非贴壁依赖型 也称悬浮型，这类细胞培养时不贴附于支持物上，可在培养液中悬浮生长，来源于血液、淋巴组织的细胞、许多肿瘤细胞等均属于此类，细胞一般呈圆形。 （3）兼性贴壁细胞 动物细胞培养中，有些细胞呈现双重性，既可以贴壁生长，也可以悬浮培养，如中国地鼠卵巢细胞，小鼠L929细胞等。 四、培养条件下动物细胞生理特性 1. 动物细胞的分裂周期较长 一般为12～48小时，他不仅随细胞种属的不同而有差异，即使同一种属不同部位的细胞所需的时间也不同 各类细胞分裂周期时间表 2. 接触抑制现象 除少数悬浮细胞外，大多数正常二倍体细胞都需要在一定的基质（如玻璃、塑料等）上贴附，伸长后才能增殖。当细胞在基质上分裂增殖，逐渐汇合成片，即每个细胞与其周围的细胞相互接触时，细胞就停止增殖，即细胞密度不再增加，这一现象称为接触抑制。 3. 有限细胞系和永久细胞系 大多数细胞继代培养后会转化为两类 一类是有限细胞系：有限细胞系即使培养条件均能满足细胞繁殖生长，它们也只能在有限的时间内生存，经过有限世代后细胞将逐渐死亡。 另一类是无限（永久细胞系） 永久细胞系 初代培养物开始传代培养后的细胞，即称之为细胞系，已获无限繁殖能力能持续生存的细胞系，称连续细胞系或无限细胞系（infinite cell line）。 4. 动物细胞的环境敏感性 动物细胞与植物细胞相比，其培养难度要大一些，其主要原因是动物细胞只有细胞膜，而没有细胞壁的保护 动物细胞与植物细胞相比对培养环境十分敏感，一切影响细胞膜变形的因素都会影响动物细胞的存活。 动物细胞培养对营养条件的要求也十分复杂 5. 动物细胞培养的环境与营养要求 动物细胞培养 的营养要求 动物细胞培养 的环境要求 5 （1） （2） PH 动物细胞培养适宜的一般在7.2~7.4，低于6.8或高于7.6都不利于细胞生长，严重时会导致细胞死亡。 培养细胞对PH值的要求因培养时间长短有关，一般原代细胞要求较严格，而永久细胞则对PH有较强的忍耐性。 （3） 溶氧与气体环境 一般在培养初期要求较低的溶氧水平，而在对数生长期或培养后期对溶氧水平要求增加，如果供氧不足将导致细胞缺氧而死亡。 除了氧气供应外，还应注意培养基的氧气和二氧化碳的平衡。 （4） 渗透压 动物培养的渗透压包括两方面： 一 是培养基的渗透压维持 二 是细胞体内的渗透压维持 动物细胞培养时渗透压的维持一般采用平衡盐溶液。 5 （1） 血清、羊水、腹水等,成分复杂、成分不稳定 （2） 目前常用的人工培养基是： MEM DMEM RPM1640 第二节 细胞工程发展趋势和应用前景 高度发达的现代工业给人类带来了巨大的物质文明，但同时也带来了严重的问题，如环境、能源和食品三大危机已构成全球性的社会问题。 人们已充分认识到，利用石化能源、化学工业和传统农业等科学技术已不能给人类带来持久的发展和繁荣。人们希望利用细胞工程等生物技术来解决人类所面临的三大危机。 医学 农牧渔业 化工 环境保护 能源 第九章 动物细胞工程 动物细胞工程 第一节 动物细胞工程概述 一、动物细胞工程发展简史 二、动物细胞工程的主要领域及意义 三、动物细胞特性 四、动物细胞培养的环境与营养要求 一、动物细胞工程发展简史 （一）融合现象的发现 （二）动物组织细胞培养技术的建立 （三）细胞融合技术的建立和杂交瘤技术的诞生 （四）动物克隆技术的建立 （一）融合现象的发现 19世纪30年代，Muller, Schwann, Virchow等相继在肺结核、天花、水痘、麻疹等病理组织中观察到多核细胞现象，但当时并没有引起人们的关注，认为这只是一种特殊现象。 1849年Lobing在骨髓中也发现了多核现象的存在，1855年～1858年，科学家们在肺组织和各种正常组织及发尖和坏死部位都发现了多核细胞。至此，自然界中广泛存在着多核细胞的事实，才被生命科学工作者接受。 1859年，A. Barli在研究黏虫的生活史时发现，某些黏虫存在着由单个细胞核融合形成多核的原生质团的情况。据此，他认为多核细胞是由单个细胞彼此融合而形成的。 （二） 动物组织细胞培养技术的建立 1839年Schwann 和Schleiden提出细胞学说时指出：“每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于