病原生物学实习三.pptVIP

实 习 三 实习主要内容 一、肥达氏反应结果观察 二、肠道病原菌的分离与鉴定（二） 三、细菌生长状态及菌落观察 四、金黄色葡萄球菌耐药性的调查（一） 五、小白鼠感染肺炎双球菌实验（录像） 肥达氏反应结果观察 一、观察方法：先看对照组；再从1管开始观察； 观察前勿摇动试管。 二、观察指标：效价 三、结果分析：了解当地人正常效价 消长意义 1.O↑H↑ 2.O↓H↓ 3.O↑ H↓ 4.O↓H↑ 5.O↑PA↑ 6.O↑PB↑ 肥达氏反应结果观察 先看对照管，无凝集现象。细菌自然下沉呈点状。 试验管自第1管看起，如有凝集(阳性反应)时则于管底呈圆片状、边缘不整齐的凝集物。其凝集的强弱可用“+~++++”号表示如下： “++++” 细菌全部凝集，液体澄清，有大片状，边缘不整齐的凝集片。 “+++” 细菌绝大部分凝集，液体有轻度混浊，凝集片较小些。 “++” 细菌部分沉淀于管底，液体半澄清，凝集片呈颗粒状。 “+” 细菌仅少量凝集，液体混浊。 “-” 不凝集。 记录结果并判定凝集效价。通常以能产生明显凝集(++)的血清最大稀释倍数做为该血清的凝集效价。 轻轻摇动，可见凝块或颗粒浮起，上清透明或有不同程度的混浊。 对照组沉淀细菌呈烟雾状升起，随即消散，液体混浊。 H凝集块疏松呈棉絮状，轻摇即升起，易摇碎。 O凝块较致密，细小颗粒，轻摇不易摇碎。 结果分析 首先应了解当地正常人效价，一般凝集价超过正常凝集价才有诊断意义。 正常值： TO 1:80 (IgM) TH 1:160 (IgG) PA 1:80 PB 1:80 真正的伤寒病人O凝集素(IgM)出现常较H凝集素(IgG)为早，存在于血清内时间较短；H凝集素产生较慢但效价较高，存在时间较长，可达数年。 肥达氏反应辅助诊断伤寒病 单份血清时注意O、H 抗体的区别 O↑H↑--伤寒 O↓H↓--不是伤寒；免疫机能低下者 O↑H↓--感染早期；交叉反应 O↓H↑--恢复期；疫苗接种；非特异回忆反应 O↑PA↑-- 甲型副伤寒 O↑PB↑-- 乙型副伤寒 双份血清时升高 4 倍以上有诊断意义 过去曾接种过伤寒菌苗或患过伤寒病，近期又感染流感或布鲁氏菌病时，可产生高效价的H凝集素及较低的O凝集素，此种反应称为非特异回忆反应 确诊为伤寒的患者中，约有10％肥达氏反应始终为阴性，故阴性结果不能完全排除伤寒的诊断 采血时间不同，肥达氏反应的阳性率也不同，发病第一周50％，第二周80％，第四周90％以上。恢复期凝集价最高，以后逐渐下降。一般以双份血清(急性期和恢复期)对比，凝集价有明显上升者作为新近感染的指征 肠道病原菌的分离鉴定（2） 菌落观察---接种双糖铁培养基---试探凝集---革兰氏染色 菌落观察 首先观察菌落是否在划线上，否则可能为污染杂菌菌落。仔细观察两种不同颜色菌落。 大小 大菌落(直径在5mm以上) 中等大菌落(直径在3mm左右) 小菌落(直径在1mm左右) 形状：点状、圆形、卵圆形、叶状等。 边缘：整齐、锯齿状、毛发状等。 表面：光滑、皱纹、湿润、干燥等。 隆起度：凸起、扁平、中心凹陷等。 结构：均质性、颗粒状等。 色调：无色、白色、黄色、褐色等。 透明度：透明、半透明、不透明等。 接种双糖铁培养基 成分：葡萄糖、乳糖、FeSO4、硫代硫酸钠、蛋白胨、脲 胨、酚红等。 接种方法： 试探凝集：取可疑病原菌菌落的一部分与沙门菌属多价血清和志贺