生化课件--抗原抗体的纯化.pptVIP

第三章 抗原抗体的纯化 免疫教研室 曾瑞红 抗原的纯化是制备高效价、高特异性抗体的先决条件； 抗体的纯化对提高免疫反应的特异性和敏感性、定量检测抗原极为重要。 根据抗原抗体的来源、研究目的、结构等的不同，其分离方法也多种多样。 第一节 离心分离法 第二节 沉淀分离 第三节 离子交换层析法 第四节 凝胶层析 第五节 亲和层析法 第六节 电泳 第一节 离心分离法 离心分离法是根据物质的沉降系数、浮力、质量、颗粒大小等方面的差异，利用强大的离心力场，使其分离、浓缩、纯化和鉴定的技术。 一、基本原理 （一）离心力 F= mω2r =mr(2π N/60)2 m:沉降固体颗粒的有效质量(g) r: 离心半径,转子中心轴到沉降颗粒之间的距离; N：离心机每分钟的转数 沉降系数 单位离心力作用下的沉降速度为沉降系数(s)。 s乘1013定义为一个沉降系数单位（S），常用S表示生物大分子的大小，如：RNA 5S,18S. 离心机 离心机一般由离心机主机，转头，离心管三部分组成。 转头可分为：水平转头,角度转头，垂直转头。 二、离心方法的类型 （一）差速离心 采用不同的离心速度和离心时间，用不同的离心力，使不同沉降速度的颗粒分批分离的方法。 如:离心前盛在离心管内的是含有大、中、小三种颗粒