福建医科大学 博士分子生物学 基因工程药物研究现状和发展趋势.ppt

基因工程药物研究现状和发展趋势 福建医科大学分子医学研究中心 林建银 教授 主要内容 基因工程基本原理及其相关技术 基因工程药物发展概况 基因工程药物的发展趋势 基因工程基本原理及其相关技术 基因工程的主要研究内容（全部过程） 获得具有遗传信息的目的基因 选择基因载体获得重组DNA 将重组DNA分子导入宿主细胞 鉴定带有目的基因的克隆 目的基因的扩增及获得目的产物 基因工程基本原理及其相关技术 基因工程的主要操作技术 PCR DNA的序列测定：酶法、化学修饰法 基因文库的构建 核酸凝胶电泳，分子杂交，细菌转化 基因工程基本原理及其相关技术 基因工程常用的工具酶 核酸限制性内切酶、外切酶 DNA连接酶 逆转录酶 基因工程基本原理及其相关技术 基因表达的主要体系及载体 原核表达体系：大肠杆菌 真核生物表达体系 酵母表达体系 昆虫细胞表达体系 哺乳动物细胞表达体系 转基因动物 转基因植物 基因工程基本原理及其相关技术 目的基因在宿主系统中的表达及其产物的分离、纯化、生物活性测定、结构的分析鉴定（基因工程制药的下游技术） 基因工程菌的培养－规模化培养 基因工程菌的破碎 基因工程动物细胞的大量培养技术（生物反应器、微载体系统） 基因工程基本原理及其相关技术 基因重组蛋白的分离纯化 分离技术：离心沉淀、膜分离、双水相萃取 纯化技术：离子交换色谱、凝胶过滤色谱、 反相色谱、疏水色谱和亲和色谱 基因工程基本原理及其相关技术 基因重组蛋白的分析和鉴定 蛋白质含量的测定：紫外吸收光谱，Lowry法， 考马斯兰法，BCA法 蛋白质纯度的鉴定：电泳法（SDS）， 蛋白质印迹（WB） 等电点的测定：等电聚焦法（IEF） 蛋白质分子量的测定：凝胶色谱法， SDS法，质谱法 基因工程基本原理及其相关技术 基因重组蛋白的分析和鉴定 蛋白质二硫键的测定 根据相关的半胱氨酸残基序列的数量，通过还原反应和烷基化反应前后的质量差异来确定 蛋白质氨基酸分析和测序 酸水解后的氨基酸分析，Edman重复降解后的蛋白质序列分析 重组蛋白质活性的测定 基因工程药物 利用基因工程研制和生产的药物，包括重组蛋白、多肽药物，反义核酸药物，DNA药物和基因工程抗体等。 基因工程药物发展概况 基因工程药物发展简史 Cohen等人（1973，1974）开创性工作拉开了基因工程研究的序幕 美国Genentech公司成立（1976），开创了基因工程制药现代生物技术产业发展的新纪元 自欧洲首先批准DNA重组的动物疫苗抗球虫病疫苗后，世界范围基因工程药物的研制和生产飞跃发展 基因工程药物发展概况 基因工程药物现状 生物技术成果60%以上集中在医药领域 全球基因工程药物销售额达450亿美元（2004年底） 该类药物销售额年增长率为15%--33%（1998-2004） 根据IMS Health公司调查资料显示，在美国、欧盟和日本已批准上市的生物技术药物有584种（2004） 基因工程药物发展概况 我国基因工程药物的发展 起步较晚 发展较快 差距较大 基因工程药物发展概况 基因工程制药的特点 可以获得天然来源难以得到的生理活性物质,使之成为新药 利用基因工程技术使的活性蛋白、多肽基因可以在原核、真核表达系统乃至生物反应器中高效表达，从而使得以往难以获得的生理活性蛋白多肽可以批量生产，保障了临床治疗的迫切需求 基因工程药物发展概况 基因工程制药的特点 可以提供足够数量的生理活性物质以对其结构功能性质进行深入研究，从而可以进一步扩大这些活性物质的使用范围。 通过基因工程技术可以不断发掘和开发更多的新型生理活性物质。 基因工程药物发展概况 基因工程制药的特点 采用基因工程、蛋白质工程技术可以改造内源生理活性物质，进一步提高其生物活性 采用基因工程技术可以获得新型化合物，扩大药物来源 基因工程药物发展概况 基因工程药物与人类基因组、后基因组研究 人类基因组 后基因组 人类基因组研究的巨大成就使药物的研究和开发进入崭新阶段 基因工程药物的发展趋势 基因工程药物的发展趋势 人类基因组计划与基因工程新药的研发 靶标的发现成为新药发现过程的主要限制因素 人类基因组计划改变了传统的药物发现模式，对新药的发现产生了巨大的影响 人类基因组计划为寻找具有治疗作用的新基因提供了更多的可能性，可以直接从基因组序列中发现新的基因工程药物 基因工程药物的发展趋势 药物靶标天然配基的发现与新药的研发 从