流式细胞术系列之-用modfit软件分析dna倍体和细胞周期_精品.ppt

DNA倍体和细胞周期分析 细胞周期和DNA倍体分析的原理 G0/G1期DNA含量为2C S期细胞,DNA含量开始增加,2C G2/M期细胞,DNA含量开始增加至4C 1、正常细胞DNA含量稳定在2C水平 2、性细胞DNA含量为1C 3、处于增殖期至分裂期细胞由 2C增加至4C 4、凋亡细胞DNA断裂,含量2C * 细胞经荧光染料(碘化丙啶，PI)染色，用流式细胞仪测定细胞DNA含量，可得到细胞周期三个时相(G0/G1、S和G2/M期)的DNA含量（％），可以反映细胞的增殖状态和非二倍体（异倍体）的DNA含量 Diploid: 100.00 % Dip G1: 54.38 % at 46.90 Dip G2: 15.91 % at 91.61 Dip S: 29.71 % G2/G1: 1.95 %CV: 5.23 G0/G1 S G2/M * DNA检测的常用术语 表示流式分析中DNA含量的分辨率或精确度。 通常由G0/G1峰的CV来反映【 %CV=（SD/mean）x 100】。 影响CV的因素主要包括两方面：仪器因素（如液流、光路、机器调试等）和样本制备及染色过程对标本的人为影响。 1. 变异系数（Coefficient of Variation，CV） * DI指的是肿瘤样本G0/G1峰的平均道数与人正常二倍体G0/G1峰的平均道数之间的比值。 DI为1 意味着二倍体（2c）（一般正常范围为0.9~1.1）。 倍体（Ploidy）：原指染色体数目。流式中用来描述总的DNA含量。 二倍体细胞有正常细胞的DNA含量但不除外染色体异常。 DI为1.9-2.1 的细胞为四倍体（CV为5%时）。在二倍体和四倍体区域之外的统称异倍体。 2. DNA指数（DNA index，DI）和倍体（Ploidy） DNA检测的常用术语 * 结果分析 CellQuest、WinMDI等软件均可以进行分析，但需要手工进行参数统计和计算； 推荐使用ModFit分析软件（分析如下：） 1、打开软件； 2、在FL2-W/FL2-A散点图中设定单个细胞门（R1），去除聚集细胞，必要时可以设两个门。 3、在FL2-A直方图中显示R1中细胞的DNA含量直方图 注：该软件可以自动分析，也可手动分析；可以分析凋亡、异倍体、各期比例等；结果均自动计算。 * ModFit分析 * ModFit分析 * ModFit分析 * ModFit分析 * ModFit分析 * ModFit分析 * File analyzed: qq.003 Date analyzed: 3-Jun-2009 Model: 1DA0A_DSF Analysis type: Manual analysis Diploid: 100.00 % Dip G1: 63.02 % at 44.61 Dip G2: 18.55 % at 86.71 Dip S: 18.44 % G2/G1: 1.94 %CV: 6.12 Total S-Phase: 18.44 % Total B.A.D.: 5.45 % Apoptosis: 15.11 % Mean: 19.05 Debris: 6.04 % Aggregates: 1.72 % Modeled events: 2775 All cycle events: 2166 Cycle events per channel: 50 RCS: 6.238 ModFit分析 * ModFit分析 * 【重要参数】 DI（DNA指数, 判断倍体数）=（标本G0/G1期细胞峰的平均荧光道数）/（正常二倍体细胞G0/G1期细胞峰的平均荧光道数） PI(增殖指数, 表示细胞的增殖活性)（%）＝（S + G2M）/（G0/G1 + S + G2M）×100% SPF(S期细胞比率, 表示细胞的增殖活性)（%）= S /（G0/G1 + S + G2M）×100% * 【倍体和细胞周期分析】 发现DNA异倍体(二倍体峰DI1.1 或0.9；四倍体峰DI2.1 或1.9)，诊断为肿瘤或癌前病变； 如无明显异倍体，但有一个突出的4倍体细胞峰和15%的S期细胞，并伴有G0/G1峰的CV9%，提示为肿瘤或增生旺盛的病变 ； 如无明显异倍体，但G0/G1峰的CV增大，并伴有10% ~ 15%的S期细胞和一个突出的4倍体峰，诊断为可疑肿瘤或增生旺盛的病变。 * 发现癌前病变，协助肿瘤早期诊断 在肿瘤的诊断、预后判断和治疗中的作用 在指导肿瘤化疗中的作用 【临床意义】 * 乳腺癌DNA异倍体患者生存率 乳腺癌肿瘤细胞异倍体患者长期生存率显著下降 * 【临床病例】 Diploid: 46.75