农作物种子检验员专业知识考试模拟试卷（室内检验员）.pptVIP

玉米种子纯度盐溶蛋白电泳鉴定方法 1.仪器设备 电泳仪、电泳槽、单籽粒粉碎器、天平、酸度计、磁力搅拌器、高速离心机、电冰箱、电炉、离心管（1.5ml）、移液管、微量进样器、恒温箱、观片灯等 2. 试 剂 丙烯酰胺、双丙烯酰胺、乳酸、甘氨酸、抗坏血酸、硫酸亚铁、氯化钠、蔗糖、甲基氯、三氯乙酸、过氧化氢、靠马斯亮蓝、无水乙醇、正丁醇（所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水） 3.溶液配制 电极缓冲液：甘氨酸，乳酸PH3.3 样品提取液：氯化钠、蔗糖、甲基氯 分离胶缓冲液：乳酸钠、乳酸PH3.0 分离胶溶液：丙烯酰胺、双丙烯酰胺 浓缩胶缓冲液：乳酸钠、乳酸PH5.2 浓缩胶溶液：丙烯酰胺、双丙烯酰胺 3%过氧化氢溶液 染色液：考马斯亮蓝溶液、10%三氯乙酸溶液 4.电泳操作 样品制备:粉碎样品→加入样品提取液； 凝胶制备: 安装玻璃板→封底缝→灌分离胶→灌浓缩胶→插入样品梳； 点样 电泳 卸板 染色：30℃ 2～4小时 5.结果计算 电泳测定值计算 样品纯度值计算 Y = 52.9 + 0.461X 6. 图 谱 分 析 1）玉米蛋白质凝胶电泳谱带区域的划分： 玉米蛋白质凝胶电泳谱带可根据分子量大小划分为三个区域： α区、 β区、 γ区。 ①α区为小分子量蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量少，谱带扩散，染色浅，品种间有差异，但不显著，应作为鉴定的次谱带区。在纯度鉴定中当β区差异不明显时，可根据该区域的谱带差异进行鉴定。 3.玉米杂交种纯度鉴定中应注意的问题 同一品种的玉米杂交种的蛋白质电泳谱带应该是很一致的，这在大多数杂交种的谱带中能得到证实，但在大量分析杂交种纯度时，我们发现有些籽粒谱带会出现一些异常情况： 1.新谱带型偶然出现：这种情况很可能是由于制种时某些籽粒发生突变或自交系中有突变体造成的，该种情况应将其当作杂交种计算纯度。 4.谱带分析鉴定的原则 1）与标准谱带完全相同的籽粒记为杂交种； 2）在主谱带区（β区）与标准谱带完全相同，而在次谱带区（α区）和辅助区（γ区）有新谱带或丢失谱带的籽粒记为杂交种； 3）有两对以上互补谱带的品种，若一对互补谱带未出现，而其它互补谱带均出现，这种籽粒仍记为杂交种； 4）未出现杂交种标志谱带的籽粒记为异品种籽粒； 5）只表达出父本或母本标志谱带的籽粒分别记为父本或母本自交粒。 * 供检样品粒数 ×100 供检样品粒数 - 非本品种粒数 X（%）= ②β区为中分子量蛋白质所组成，在该区域中蛋白质谱带数量多，染色深，品种间差异大，为纯度鉴定主要应用区。 ③γ区为高分子量蛋白质所组成。该区域蛋白质谱带数量多，染色谱带细，易受电泳条件的影响，对于虫蛀、发霉、生病的籽粒，该区域谱带会部分或全部消失，在该区域品种间差异小，不太容易观察，最好不作为纯度鉴定用。 2）玉米蛋白质电泳谱带的特异性 不同的玉米品种具有不同的蛋白质组成，所以表现在电泳谱带上就有不同的谱带类型，主要是谱带数目、位置、相对强弱的差异。玉米蛋白质电泳就是利用这些差异来鉴定品种的，也就是说，不同的玉米品种其蛋白质凝胶电泳谱带有其特异性。电泳谱带能准确地表现出这些品种间的差异。 3）玉米杂交种和亲本自交系的蛋白质电泳谱带类型 ①互补型谱带：在杂交种中出现两条谱带，其一条谱带和父本自交系的一致，另一条和母本自交系的一致，则两条谱带称作互补带，这表明杂交种的两条谱带分别来自于父母本自交系。 ②偏母或偏父型谱带：这种类型的谱带是杂交种继承了母本或父本自交系的谱带，这种情况有时是继承两条，有时只继承一条。互补型谱带中任意一条也可看作是偏父或偏母的谱带。 ③新谱带型：这种类型的谱带是指杂交种中出现的一条或多条谱带是父母本双亲自交系均不具备的谱带，既不象父本也不象母本的谱带，新谱带型并不是左右杂交种均会发生。 杂交种和亲本自交系谱带关系一般有以上几种类型，作为杂交种纯度鉴定最常用的是互补型谱带，这也是杂交种中常出现的一种谱带类型，其次为偏亲型和新增型谱带。 2. 丢失某些谱带现象：在杂交种中有多条互补型谱带时，其中某粒可能有一条谱带不出现互补而呈现偏亲型谱带出现，其它互补带仍然出现，这说明该籽粒也为杂交种，只是杂交不完全或发生突变。这种情况应将其记入杂交种计算纯度。 3. 越代种的谱带型式：当有F2代玉米掺入杂交种或用越代种冒充杂交种时，同一批种子的不同籽粒的蛋白质电泳谱带表现很大差异，采用玉米蛋白质电泳法就能很容易的鉴定出来。 4.正反交制种的杂交种谱带型式：经实验表明，尽管正反交得到的杂交种一代在籽粒形态上有很大差异，但由于正反交种子具有相同的遗传背景，其电泳谱带上的结果完全一致。 农作物种子检验员专业知识考试模拟试卷（室内检验员） 一、选择题（从四个备选项中选出最符合题意要求的一项填在括号