2.1 微生物的实验室培养（40张PPT）.ppt

1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方 H2O 定容至1000ml NaCl 5g 蛋白胨 10g 牛肉膏 5g 琼脂20.0g 四.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌： 6.倒平板： 培养基、培养皿 分散成单个细胞, 形成单个菌落 倒平板 约50℃ 防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染 灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基 1.培养基灭菌后，需要冷却到50℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉温度下降到刚刚不烫手即可。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：①防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染 ②避免培养基中水分过快蒸发。 答：最好不要用这个平板培养微生物。 防止空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。 ㈡纯化大肠杆菌： ⑴平板划线法： 菌种 划3个平板 1个不划线 1.接种： 接种环 防止划破培养基 （重复实验） （空白对照） 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一步：避免接种环上原来可能存在的微生物污染培养物 每次划线前：杀死上次接种环上残留的菌种 操作结束：杀死残留菌种，避免细菌污染环境和操作者 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 6支试管，分别加入9ml无菌水 1ml 101 1ml 102 1ml 103 1ml 104 1ml 105 1ml 106 ⑵稀释涂布平板法： a.梯度稀释菌液： 菌液 微量 移液器 ⑵稀释涂布平板法： b.涂布平板： 不超过0.1ml 各梯度分别涂布3个平板 1个不涂布作空白对照 滴 灼 试 涂 稀释103倍 稀释104倍 稀释105倍 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如，酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等。 微生物的类群 原生生物： 原核生物: 真菌: 病毒 如酵母菌 单细胞的动植物 如草履虫、单细胞藻类等 无细胞结构： 真核细胞 细菌、蓝藻 原核细胞 有细胞结构 特点：个体微小、结构简单 微生物基础知识 1.细菌的形态 球菌 弧菌 杆菌 螺旋菌 细菌 单个 或少数菌体 2）.特征： 大小、形状、光泽度、 颜色、透明度等。 3）.功能： 1）.定义： 2、菌落 鉴定菌种的重要依据 固体培养基上 大量繁殖 子细胞群体 病毒 1.结构:由核酸和蛋白质构成。 吸附 注入 合成 释放 组装 2.病毒的繁殖 病毒的增殖一般可分五个阶段，即： 吸附→注入核酸→合成核酸和蛋白质→组装→释放 3.病毒的营养方式 ：寄生 课题1 微生物的实验室培养 1.提供营养和条件 2.防止污染 基本物质： **一.微生物需要的营养物质及功能 1.碳源 2.氮源 3.无机盐 4.水 ：凡是能为微生物提供所需碳元素的营养物质。 ①无机碳源：CO2；NaHCO3；碳酸盐等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、蛋白质、花生粉饼、石油等 ⑴.概念 ⑵.来源： ⑶.作用： 1.微生物的碳源 ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源 ①无机氮源：N2、NH4+、NO3-、NH3等 ②有机氮源：尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基