《分子生物学教学》第三章 可移动的遗传因子.pptVIP

第三章可移动的遗传因子和染色体外遗传因子 第二节 质粒(plasmid) 一、定义 独立于染色体外，能进行自主复制的细胞质遗传因子。 质粒在多种微生物细胞和某些真核细胞中以共价闭合环状(covalently closed circle)的超螺旋双链DNA分子的形式存在。 。 二、质粒的分类 细菌性因子(致育因子或F 因子) 产大肠杆菌素因子(col 因子) 抗药因子(R因子)：G- 杆菌耐药性质粒 淋病奈瑟菌耐药性质粒 毒力相关性质粒： 肠致腹泄性大肠杆菌(ETEC) 毒力相关性质粒 耶尔森菌毒力相关性质粒 R因子相关性转座子 其它质粒： 根癌农杆菌的致癌Ti质粒 假单胞杆菌中降解烷烃和芳香烃的质粒 酵母菌中大小为2?m 的质粒 放线菌中与抗生素合成、抗生素抗性有关的质粒等 噬粒(phagemid或phasmid) 在细菌细胞里： 既可以如同质粒一样复制生成双链DNA。 (称为phagemid) 当辅助噬菌体存在时，又可如同单链噬菌体一样复制出单链DNA，并包装成噬菌体颗粒释放出宿主细胞。辅助噬菌体是一类自身DNA复制效率极低的突变型，但可为宿主细胞的质粒DNA提供的复制和包装所需的蛋白酶和外壳蛋白。 (称为phasmid) 噬粒(phagemid或phasmid)——由质粒载体和单链噬菌体载体构建成的既有质粒的复制起点，又有噬菌体的复制起点的一种嵌合体。 质粒的特性 独立复制 不相容性 可有几种质粒同时共存在于一个细菌内，而有些质粒则不能共存 有多个基本基因 复制起动区 ，抗生素标记 ，操纵子 许多限制性内切酶的切点 转移性 选择性标记： 常用抗药性筛选标记，如氨苄青霉素、四环素、氯霉素、卡那霉素等 质粒的复制 严谨型（低拷贝数）质粒：在每个细胞中只有1-2个拷贝 松弛型（高拷贝数）质粒 ：在每个细胞中可以有10-100个拷贝 * * 转座子( Transposon，Tn) ，又称跳跃因子，其实质是一定长度的DNA 片段，因为可以从染色体的一个位点“跳”到另一个位点，或从一条染色体转移到另一条染色体上而得名。 1951年，美国McClintock在玉米中首先发现了DNA 转座子。 McClintock B. Chromosome organization and gene expression. Cold Spring Harbor Symp, 1951,16:131. 1983年获诺贝尔奖。 SG-紫色色素的结构基因，它附近的一个控制因 子DS（称为离解因子或分化变异因子）以一定的速率关闭SG，使玉米籽粒不能产生紫色色素，而成为黄色。DS从SG附近跳开，SG所受的控制作用即被解除，玉米籽粒又变成紫色。而DS又受到AC控制，跳到远离AC处，或者AC本身跳开，DS即不受AC的控制，它又可以发挥对结构基因SG的抑制作用，使玉米籽粒成为黄色。 这些控制因子跳动得非常之快，使得受它们控制的颜色基因时关时开，于是玉米籽粒便出现了斑斑点点。 直到1967 年Shapiro在对大肠杆菌的半乳糖操纵子的研究中发现插入序列这类转座因子，转座子的概念才被普遍承认和接受。 1984年，Shepherd等在玉米中又发现了另一类转座子—反转录转座子(Retrotransposon)。 第一节 转座子 定义：从一个部位转移到另外一个部位的DNA序列。 存在场所：质粒、基因组 结果：影响所在位置基因的表达、基因组突变 真核生物中的转座子 对基因组的作用： DNA序列缺失、倒位、移动 遗传学效应： 引起插入突变 产生新的基因 产生染色体畸变 引起生物进化 一、转座子的分类和结构特征 （1）DNA转座子 通过DNA复制或直接切除产生可移动片段，该片断插入基因组后导致基因突变或重排，一般不改变基因组大小。 根据转座的自主性，这类转座子又分为自主转座子和非自主转座子，前者本身能够编码转座酶而进行转座，后者则要在自主转座子存在时才能够实现转座（玉米的Ac/Ds体系）。 （2）反转录转座子 转座因子的DNA 先被转录成RNA，再借助反转录酶反转录成DNA，插入到新的染色体位点，从而引起基因的突变或重排。正因为反转录转座子是通过复制方式实现转座，每转座一次，其拷贝数就增加一份，因而极大地增加了基因组的大小。 转座子结构共同点 两端有反向重复序列 转座后靶位点正向重复 编码与转座有关的蛋白 可以在基因组中移动 按转座机制进行分类，转座子又可分为以下三类： 复制型转座（replicative transposition） 转座的整个DNA序列是原转座因子的一个拷贝，而不是它本身。这种类型