第十七章 高效液相色谱.ppt

第十七章 高效液相色谱分析 §17-1 概述 §17-2 高效液相色谱仪 §17-3 液-固色谱法 §17-4 液-液色谱法 §17-5 离子交换色谱法 §17-6 空间排阻色谱法 §17-7 液相色谱分离类型的选择 §17-7 高效液相色谱分离类型的选择 * 一、高效液相色谱法的特点 1. 高压 2. 高速 §17-1 概述 对载液施加15~30MPa，甚至高达50MPa 载液流速可达1~10mL·min-1，一般都小于1h。 3. 高效： 可达5000~30000塔板/米 2000－5000塔板/米（毛细管） 2000塔板/米（填充柱） 采用高灵敏度检测器，最小检测限可达10-11 g 4. 高灵敏度： 二、高效液相色谱与气相色谱的比较 1. 分析对象不同 分析气体和沸点较低的化合物，及相对分子质量小于400的非离子型化合物。 气相色谱法： 20％ 不受分析对象挥发度和热稳定性的限制，能分析相对分子质量大于400的有机化合物。 液相色谱法： 适用于分析有机及生化试样大分子、不稳定的天然产物、高分子化合物、离子型化合物 80％ 2. 流动相不同 载气惰性，不参与分配过程，与组分分子没有亲合作用，仅起运载的作用； 气相色谱： 载液对组分分子有一定的亲合作用，与固定相争夺组分分子，因而增大了分离的选择性。 液相色谱： 通过调节流动相的极性、离子强度与pH值，来选择最佳的分离条件 载液种类较多，因而选择较多； 3. 操作条件的差异 1）液相色谱在室温下操作，较低柱温有利于分离； 2）组分在载液中的扩散系数比在载气中小10-4倍， 分子扩散小，但传质阻力大。 3）载液粘度比载气大102倍，须采用高的入口压力 4. 分离机理的异同点 可以根据离子交换作用或分子尺寸大小的差异而进行离子交换色谱和空间排阻色谱分离。 三、 影响色谱峰扩展及色谱分离的因素 1. 涡流扩散项 2. 分子扩散项 3. 传质阻力项 1） 流动项传质阻力项 a. 流动的流动项中的传质阻力项 流路中间分子移动速度大，而接近固定相的分子移动速度相对较小。 b. 滞流的流动项中的传质阻力项 2） 固定相传质阻力项 固定相表面的多孔性造成某一部分流动相滞留在固定液微孔内不再流动： 分子扩散项可忽略不计，影响柱效能的主要是传质阻力项 与气谱相比： 气相色谱法(GC)和液相 色谱法(LC)的曲型的H-u曲线 §17-2 高效液相色谱仪 一、高压输液系统 1. 贮液器 2.高压输液泵： 压力：150～350×105 Pa 要求：流速恒定、压力平稳、无脉冲、流量可调节 用来贮存流动相，由玻璃、不锈钢、聚四氟乙烯塑料等制成。 1～2 L 恒流泵：一定条件下输出流量恒定 恒压泵：输出压力恒定 二、进样系统 进样系统包括进样口、注射器和进样阀等 进样方式： 阀进样 注射器进样 作用： 把分析试样送入色谱柱 耐高压的六通进样阀 三、分离系统 包括色谱柱、恒温器和连接管等 直型不锈钢管，内径2～6mm，柱长5～40cm 减小填料粒度以提高柱效； 装柱技术是获得高柱效的关键因素。 发展趋势： 四、检测系统 紫外光度检测器，荧光检测器， 电导检测器 1. 要求： 灵敏度高，响应快，线性范围宽，噪声小，死体积极小，对温度和流量变化不敏感 2. 分类 仅对被分离组分的物理或物理化学特性有响应 a. 溶质型检测器 b. 总体检测器 对试样和流动相总的物理性质或化学性质有响应 差示折光检测器 五、附属装置 包括脱气、梯度洗脱、再循环、恒温、自动进样、馏分收集以及数据处理等装置 梯度淋洗: 在分离过程中使用两种或两种以上不同极性的溶剂，按一定程序连续改变比例，使载液的极性、pH值、或离子强度相应变化，以达到提高分离效果和缩短分析时间的目的。 一、分离原理 根据各组分在固定相上吸附能力的不同进行分离 以固体吸附剂为固定相，其表面具有活性吸附中心 §17-3 液-固色谱法 适用于相对分子质量中等的油溶性试样、异构体 极性: 非极性: 活性碳 5～10μm的硅胶吸附剂 包括硅胶、氧化铝及分子筛 二、液-固色谱固定相 三、液-固色谱流动相 洗脱剂将试样溶解和分离； 调节剂用以调节洗脱剂的极性和强度。 1. 尽量使用高纯度试剂( 粘度尽可能小）作流动相。 2. 避免与固定相发生作用而使柱效下降或损坏柱子。 3. 试样在流动相中应有适宜的溶解度，防止产生沉淀。 4. 应与所用检测器相匹配，价格便宜，清洁环保。 §17-4 液-液色谱法 一、分离原理 试样中各组分在两相中的分配系数存在差异，使各组分在两相间进行分配而得到分离。 流动相与固定相互不相溶，两者之间有一个明显